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1、目的:以人胚胎神經(jīng)干細(xì)胞(ReNcell CX)和小鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞作為體外培養(yǎng)的模型,對(duì)比氰戊菊酯在有無雌激素的條件下,對(duì)人胚胎神經(jīng)干細(xì)胞和小鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞的毒性作用,對(duì)神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞的影響,以及對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞增殖、分化、遷移的影響,探討雌激素干擾特性在氰戊菊酯神經(jīng)發(fā)育毒性中的作用及可能機(jī)制。
方法:以不同濃度的氰戊菊酯(FEN)、FEN聯(lián)合雌激素(E2)和FEN聯(lián)合雌激素受體抑制劑(ICI182,780)對(duì)ReNcell
2、 CX和小鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞染毒,用CCK8試劑盒測(cè)定染毒48h后的細(xì)胞毒性,并采用免疫熒光細(xì)胞化學(xué)技術(shù)分析ReNcell CX的增殖、分化和神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞的生長(zhǎng)發(fā)育狀況。
結(jié)果:50μg/ml FEN在±E2的條件下,對(duì)ReNcell CX和小鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞均有明顯的細(xì)胞毒性,明顯抑制ReNcell CX的細(xì)胞增殖和遷移,而經(jīng)典雌激素核信號(hào)通路抑制劑ICI182,780可明顯減輕FEN的這些效應(yīng);E2可抑制ReNcell
3、CX向星形膠質(zhì)細(xì)胞的分化,50μg/ml FEN在±E2的條件下,也能明顯抑制ReNcell CX向星形膠質(zhì)細(xì)胞的分化,而且與ICI182,780聯(lián)合作用同樣具有這種效應(yīng),要注意的是,10μg/ml FEN單獨(dú)作用未顯示這種效應(yīng),但與E2聯(lián)合作用卻能明顯抑制ReNcell CX向星形膠質(zhì)細(xì)胞的分化;在小鼠海馬細(xì)胞原代培養(yǎng)模型中,E2(10nmol/L)可明顯促進(jìn)神經(jīng)元的存活,表現(xiàn)為NeuN和Tuj等神經(jīng)元特異標(biāo)志免疫反應(yīng)陽性細(xì)胞率明顯升
4、高,而50μg/ml FEN可明顯抑制E2的這種效應(yīng),10μg/ml和50μg/ml FEN單獨(dú)作用均可引起明顯的神經(jīng)元丟失,而ICI182,780可明顯減輕FEN的這種效應(yīng);對(duì)神經(jīng)突起生長(zhǎng)有類似效應(yīng),所不同的是ICI182,780未能減輕50μg/ml FEN抑制突起生長(zhǎng)效應(yīng);實(shí)驗(yàn)處理對(duì)混合培養(yǎng)體系中原漿型星形膠質(zhì)細(xì)胞比例的影響,與神經(jīng)元丟失效應(yīng)相呼應(yīng)。
結(jié)論:雌激素經(jīng)典核信號(hào)通路在FEN對(duì)ReNcell CX和小鼠海馬神經(jīng)
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