氰戊菊酯通過雌激素干擾效應(yīng)引起神經(jīng)發(fā)育毒性的體外研究.pdf

1、目的：以人胚胎神經(jīng)干細胞(ReNcell CX)和小鼠海馬神經(jīng)細胞作為體外培養(yǎng)的模型,對比氰戊菊酯在有無雌激素的條件下,對人胚胎神經(jīng)干細胞和小鼠海馬神經(jīng)細胞的毒性作用,對神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細胞的影響,以及對神經(jīng)干細胞增殖、分化、遷移的影響,探討雌激素干擾特性在氰戊菊酯神經(jīng)發(fā)育毒性中的作用及可能機制。
　　方法：以不同濃度的氰戊菊酯(FEN)、FEN聯(lián)合雌激素(E2)和FEN聯(lián)合雌激素受體抑制劑(ICI182,780)對ReNcell

2、 CX和小鼠海馬神經(jīng)細胞染毒,用CCK8試劑盒測定染毒48h后的細胞毒性,并采用免疫熒光細胞化學(xué)技術(shù)分析ReNcell CX的增殖、分化和神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細胞的生長發(fā)育狀況。
　　結(jié)果：50μg/ml FEN在±E2的條件下,對ReNcell CX和小鼠海馬神經(jīng)細胞均有明顯的細胞毒性,明顯抑制ReNcell CX的細胞增殖和遷移,而經(jīng)典雌激素核信號通路抑制劑ICI182,780可明顯減輕FEN的這些效應(yīng);E2可抑制ReNcell

3、CX向星形膠質(zhì)細胞的分化,50μg/ml FEN在±E2的條件下,也能明顯抑制ReNcell CX向星形膠質(zhì)細胞的分化,而且與ICI182,780聯(lián)合作用同樣具有這種效應(yīng),要注意的是,10μg/ml FEN單獨作用未顯示這種效應(yīng),但與E2聯(lián)合作用卻能明顯抑制ReNcell CX向星形膠質(zhì)細胞的分化;在小鼠海馬細胞原代培養(yǎng)模型中,E2(10nmol/L)可明顯促進神經(jīng)元的存活,表現(xiàn)為NeuN和Tuj等神經(jīng)元特異標(biāo)志免疫反應(yīng)陽性細胞率明顯升

4、高,而50μg/ml FEN可明顯抑制E2的這種效應(yīng),10μg/ml和50μg/ml FEN單獨作用均可引起明顯的神經(jīng)元丟失,而ICI182,780可明顯減輕FEN的這種效應(yīng);對神經(jīng)突起生長有類似效應(yīng),所不同的是ICI182,780未能減輕50μg/ml FEN抑制突起生長效應(yīng);實驗處理對混合培養(yǎng)體系中原漿型星形膠質(zhì)細胞比例的影響,與神經(jīng)元丟失效應(yīng)相呼應(yīng)。
　　結(jié)論：雌激素經(jīng)典核信號通路在FEN對ReNcell CX和小鼠海馬神經(jīng)