ApoE4對(duì)HEK293細(xì)胞線粒體形態(tài)和功能的影響.pdf

1、背景介紹:載脂蛋白E4(ApoE4)是現(xiàn)在所知的阿爾茨海默氏癥(Alzheimer’s disease,AD)的最主要的發(fā)病因素。ApoE4攜帶者患阿爾茨海默氏癥的風(fēng)險(xiǎn)高達(dá)60％。有研究結(jié)果提示ApoE4可影響線粒體功能,但是沒(méi)有實(shí)驗(yàn)直接研究ApoE4對(duì)線粒體形態(tài)的影響。由于線粒體的形態(tài)對(duì)其功能的維持具有重要意義,本實(shí)驗(yàn)研究了ApoE4對(duì)HEK293線粒體形態(tài)變化的影響,并在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中證明這些形態(tài)和數(shù)目的變化伴隨著線粒體功能的損傷。

2、r>　　目的:研究ApoE4對(duì)線粒體形態(tài)、數(shù)目和功能的影響。
　　方法:以pEGFPN1為載體構(gòu)建ApoE的三種基因多態(tài)型ApoE2,ApoE3和ApoE4的綠色熒光質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染人胚腎細(xì)胞株(HEK293),用線粒體特異性的染料在轉(zhuǎn)染了ApoE綠色熒光質(zhì)粒的HEK293細(xì)胞上進(jìn)行免疫細(xì)胞熒光實(shí)驗(yàn)。在共聚焦顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染了ApoE4的HEK293細(xì)胞中的線粒體形態(tài)和數(shù)目等方面的變化。并使用JC-1檢測(cè)試劑盒檢測(cè)線粒體膜電位的變化,用

3、ATP檢測(cè)試劑盒檢測(cè)細(xì)胞中ATP生成量的變化,以檢測(cè)ApoE4對(duì)線粒體膜電位和ATP生成的影響。
　　結(jié)果:
　　(1)ApoE4能夠顯著引起線粒體的數(shù)目減少,彎曲形態(tài)線粒體數(shù)目增多;
　　(2)ApoE4引起線粒體膜電位降低;
　　(3)ApoE4引起ATP生成量減少;
　　(4)轉(zhuǎn)染ApoE4的細(xì)胞中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)標(biāo)志物GADD153/CHOP和BiP表達(dá)量降低。
　　結(jié)論:ApoE4導(dǎo)致細(xì)胞中線