酶聯(lián)免疫吸附、顯色原位雜交與免疫組化在檢測(cè)乳腺癌HER2-neu表達(dá)狀態(tài)的相關(guān)性研究.pdf

1、目的 乳腺癌原癌基因HER2/neu表達(dá)狀態(tài)的研究報(bào)告雖然較多，但由于所選的檢測(cè)標(biāo)本、目的及檢測(cè)方法和試劑的不同，檢測(cè)結(jié)果相差較大，難于確切的反映HER2/neu基因在乳腺癌中的真實(shí)表達(dá)狀態(tài)。針對(duì)上述在檢測(cè)中存在的問(wèn)題，我們選擇HER2/neu為研究對(duì)象，采用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)、免疫組化(IHC)及顯色原位雜交(CISH)分別檢測(cè)乳腺癌患者的血清及病理組織學(xué)標(biāo)本中HER2/neu的表達(dá)狀態(tài)，探討如何準(zhǔn)確檢測(cè)乳腺癌HER2

2、/neu表達(dá)狀態(tài)，分析乳腺腫瘤患者血清HER2的水平、影響因素及臨床意義；比較CISH與IHC在檢測(cè)組織HER2/neu表達(dá)狀態(tài)的一致性和差異性，探討CISH在檢測(cè)乳腺癌患者組織中HER2/neu基因表達(dá)狀態(tài)的臨床應(yīng)用，為乳腺癌治療及預(yù)后判斷提供參考。 材料和方法 收集2005年11月至2006年3月在河南省腫瘤醫(yī)院住院治療的83例乳腺腫塊患者，其中轉(zhuǎn)移性乳腺癌13例；乳腺良性病變20例；可手術(shù)原發(fā)性乳腺癌50例，均經(jīng)病

3、理證實(shí)。全部患者治療前晨起空腹抽取靜脈血 2ml，另外收集10例健康女性靜脈血作為對(duì)照組，分離血清保存于-70℃低溫冰箱中，并收集可手術(shù)乳腺癌患者術(shù)后石蠟病理標(biāo)本。 采用ELISA方法檢測(cè)10例正常人、20例乳腺良性病變、50例早期手術(shù)乳腺癌及13例晚期轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者血清HER2的水平，對(duì)乳癌手術(shù)組患者術(shù)后病理組織標(biāo)本用IHC檢測(cè)組織HER2/neu蛋白的表達(dá)情況，探討血清HER2與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤負(fù)荷及組織HER2/neu的

4、關(guān)系；然后采用SPOT-Light HER2 CISHTM試劑盒，以CISH對(duì)40例IHC檢測(cè)分別為(+++)、(++)、(+)和(-)的術(shù)后乳腺癌石蠟病理標(biāo)本進(jìn)行HER2/neu基因狀態(tài)的檢測(cè)，探討二者的相關(guān)性。計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，以t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料采用x<'2>和kappa檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，運(yùn)算全過(guò)程均在SPSS10．0軟件包內(nèi)完成，以a=0．05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。 結(jié)果 1．健康對(duì)照組、乳腺良性病

5、變組及原發(fā)性乳癌手術(shù)組之間的血清HER2水平無(wú)明顯差異(p>0．05)，晚期轉(zhuǎn)移性乳腺癌組的血清HER2水平與前三組之間有顯著性差異(p<0．05)，晚期轉(zhuǎn)移性乳腺癌組的血清HER2陽(yáng)性率與前三組相比，差異有顯著性(p<0．001．)。 2．原發(fā)性乳腺癌手術(shù)組血清HER2與原發(fā)腫瘤大小、淋巴結(jié)及組織HER2/neu表達(dá)的關(guān)系：早期乳癌手術(shù)組原發(fā)腫塊<3cm和≥3cm患者血清HER2陽(yáng)性率分別為6．06％(2/33)和33．3％(

6、5/15)，差異有顯著性(P<0．05)；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性和陰性的血清HER2陽(yáng)性率分別為11．5％(3／26)和16．7％(4/24)，差異無(wú)顯著性(P>0．05)。原發(fā)性乳腺癌手術(shù)組中，20例免疫組化陽(yáng)性患者中，血清HER2升高4例，30例免疫組化陰性患者中，血清HER2升高3例，差異無(wú)顯著性(P>0．05)。 3．經(jīng)CISH檢測(cè)，在IHC(+++)的8例標(biāo)本中，7例為HER2/neu基因擴(kuò)增，1例無(wú)基因擴(kuò)增；IHC(++)的

7、13例標(biāo)本中，5例為HER2/neu基因擴(kuò)增，8例無(wú)擴(kuò)增；IHC(+)的10例標(biāo)本中，2例為HER2/neu基因擴(kuò)增，8例無(wú)基因擴(kuò)增；IHC(-)的9例標(biāo)本均無(wú)基因擴(kuò)增。兩種方法對(duì)乳腺癌組織HER2/neu表達(dá)狀態(tài)的檢測(cè)有較好的一致性(kappa=0．458） 結(jié)論 1．血清HERE與腫瘤負(fù)荷密切相關(guān)，可作為重要的預(yù)后因素，在乳腺癌隨訪監(jiān)測(cè)療效觀察尤其是Herceptin治療后的療效觀察中發(fā)揮其獨(dú)到的作用。 2．