鈀配合物對結(jié)核桿菌RecA intein的剪接抑制作用.pdf

1、結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿菌感染引發(fā)的一種傳染病。目前由于新型耐多藥結(jié)核病的出現(xiàn)，傳統(tǒng)的抗結(jié)核病藥物如異煙肼和利福平等在治療過程中遇到了困難，使得結(jié)核病疫情在全世界范圍內(nèi)有擴(kuò)大的趨勢，因此，研究抗病機(jī)理不同作用靶點(diǎn)不同的抗結(jié)核病藥物顯得尤為關(guān)鍵。Intein是一段插入序列，在蛋白質(zhì)水平下具有自剪接功能。在結(jié)核分枝桿菌中有三類重要的酶RecA、DnaB和SufB是通過intein自剪接得到的，而對intein自剪接功能的抑制可以阻斷活性RecA

2、、DnaB和SufB的生成，進(jìn)而影響結(jié)核桿菌的生長繁殖。本論文主要依據(jù)RecAintein生物學(xué)功能以及在結(jié)核分枝桿菌中的發(fā)揮的重要作用，利用熒光光譜手段檢測了五種簡單的鈀(Ⅱ)配合物對RecAintein的剪接抑制作用，并對intein突變體△△Ihh-CM和五種鈀(Ⅱ)配合物的相互作用做了簡單的分析。
　　 第一章第一小節(jié)通過文獻(xiàn)調(diào)研對本篇論文的研究意義、研究背景、研究現(xiàn)狀以及研究手段等方面做了簡單介紹。第二小節(jié)通過文獻(xiàn)綜述

3、，分別從蛋白質(zhì)內(nèi)含子intein的蛋白剪接作用、命名規(guī)則、保守基序、剪接機(jī)理以及intein的藥物靶點(diǎn)的應(yīng)用方面做了簡單的闡述。第三小節(jié)介紹了實(shí)驗(yàn)中所使用的研究方法熒光光譜。
　　 第二章利用GFP-intein融合蛋白剪接可以生成綠色熒光蛋白GFP的過程，研究了Pd(bipy)Cl2、Pd(phen)Cl2、trans-Pd(NH3)2Cl2、cis-Pd(NH3)2Cl2以及[Pd(dien)Cl]Cl五種鈀(Ⅱ)配合物對i

4、ntein自剪接活性的抑制作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，五種鈀配合物均對intein的自剪接有抑制作用，且trans-Pd(NH3)2Cl2的抑制活性最高，IC50值為30μM，由于單齒配合物[Pd(dien)Cl]Cl鈀上只有一個(gè)氯有水解活性，對剪接相關(guān)的氨基酸封閉作用不大，因此其intein自剪接的抑制活性小于其他四個(gè)二齒配體的鈀配合物。此外，通過已有文獻(xiàn)報(bào)道的關(guān)于鉑配合物結(jié)構(gòu)對intein自剪接抑制的實(shí)驗(yàn)結(jié)果對比分析來看，鈀配合物對inte

5、in剪接的抑制過程和機(jī)理可能與鉑配合物存在著差別。
　　 第三章通過熒光對△△Ihh-CM與鈀配合物的相互結(jié)合做了簡單分析。首先檢測了GSH和EDTA對trans-Pd(NH3)2Cl2的intein剪接抑制作用的影響，實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)當(dāng)trans-Pd(NH3)2Cl2阻斷GFP-intein剪接生成GFP后，在實(shí)驗(yàn)體系中加入GSH可以使熒光恢復(fù)，說明GFP-intein進(jìn)行正常的剪接并生成了熒光基團(tuán)GFP，而EDTA不能使這種剪