細胞的不同培養(yǎng)密度及培養(yǎng)方式對肝癌細胞相關(guān)干細胞基因表達的影響.pdf

1、貴陽醫(yī)學院2014屆碩士研究生學位論文1（《中國圖書資料分類法》分類號）單位代碼：10660分類號R735.7學號：10660S110238貴陽醫(yī)學院貴陽醫(yī)學院20142014屆碩士學位論文屆碩士學位論文細胞的不同培養(yǎng)密度及培養(yǎng)方式對肝癌細胞的不同培養(yǎng)密度及培養(yǎng)方式對肝癌細胞細胞相關(guān)干細胞基因表達的相關(guān)干細胞基因表達的影響影響研究生：陳妮導師：周力教授洪陽教授年級：2011級專業(yè)：消化內(nèi)科專業(yè)貴陽醫(yī)學院2014屆碩士研究生學位論文3細胞

2、的不同培養(yǎng)密度及培養(yǎng)方式對肝癌細胞細胞的不同培養(yǎng)密度及培養(yǎng)方式對肝癌細胞相關(guān)干細胞基因表達的相關(guān)干細胞基因表達的影響影響課題來源：貴州省教育廳自然科學研究項目：黔教科（2008）022號貴州省科技廳自然科學基金項目：黔科合J字[2008]2280號專業(yè)：消化內(nèi)科研究生：陳妮導師：周力教授洪陽教授中文摘要目的目的觀察肝癌細胞（LM3、HepG2）在不同培養(yǎng)密度以及在不同培養(yǎng)方式條件下干細胞基因表達情況，進一步了解肝癌細胞的生存狀態(tài)對肝癌干

3、細胞與肝癌的關(guān)系，探討肝癌發(fā)生的分子水平機制，為臨床肝癌診斷及治療提供有力依據(jù)。方法方法第一部分：肝癌細胞在不同培養(yǎng)密度條件下干細胞相關(guān)基因的表達情況采用人LM3、HepG2肝癌細胞系為模型細胞，常規(guī)細胞培養(yǎng)；通過蛋白免疫印跡法（Westernblot）檢測LM3、HepG2肝癌細胞在低（種植細胞數(shù)為1107個皿）、中（種植細胞數(shù)為2107個皿）和高（種植細胞數(shù)為3107個皿）等不同培養(yǎng)密度條件下，干細胞相關(guān)基因（Oct4、Sox2、N

4、anog和Wnt5b）的表達情況。第二部分：肝癌細胞在不同培養(yǎng)方式下干細胞相關(guān)基因的表達情況采用人LM3肝癌細胞系為模型細胞，常規(guī)細胞培養(yǎng)（貼壁）以及微球體培養(yǎng)（懸?。┑姆绞剑煌ㄟ^蛋白免疫印跡法（Westernblot）分析LM3肝癌細胞在不同培養(yǎng)方式下干細胞相關(guān)基因（Oct4、Sox2、Nanog和Wnt5b）的表達情況；采用免疫熒光細胞化學方法觀察肝癌細胞LM3在常規(guī)細胞培養(yǎng)以及微球體培養(yǎng)的方式下干細胞相關(guān)基因（Oct4、Sox2、