人肝癌組織中肝癌干細(xì)胞的分離培養(yǎng)與鑒定.pdf

1、目的：體外分離及培養(yǎng)人肝癌組織中的肝癌干細(xì)胞并鑒定其生物學(xué)特性。
　　方法：收集臨床肝癌患者術(shù)后肝癌組織，用酶消化法分離肝癌細(xì)胞，將其接種于無血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)，并在超低粘附24孔板中觀察肝癌干細(xì)胞克隆球生長情況；用MTT比色法檢測肝癌干細(xì)胞增值能力；用肝癌干細(xì)胞表面標(biāo)記物CD90、CD133抗體，采用流式細(xì)胞儀鑒定并分選CD90+細(xì)胞、CD90-細(xì)胞，CD133+細(xì)胞、CD133-細(xì)胞，將4種不同細(xì)胞組成CD90+細(xì)胞CD133+

2、細(xì)胞、CD90-細(xì)胞CD133+細(xì)胞、CD133-細(xì)胞CD90+細(xì)胞及CD133-細(xì)胞CD90-細(xì)胞，分別接種于裸鼠皮下觀察其成瘤能力并記錄腫瘤體積；將裸鼠成瘤后的組織進(jìn)行HE染色。
　　結(jié)果：在無血清培養(yǎng)基中，肝癌干細(xì)胞可以形成少量的細(xì)胞克隆球；MTT比色法檢測，在連續(xù)72小時里，肝癌干細(xì)胞克隆球始終處于持續(xù)增值狀態(tài)；采用流式細(xì)胞儀檢測顯示肝癌干細(xì)胞表面標(biāo)記物CD90、CD133陽性率分別是7.2％、8.8%，并成功分選出CD9

3、0+細(xì)胞、CD90-細(xì)胞、CD133+細(xì)胞、CD133-細(xì)胞，將組成的4種不同細(xì)胞組分別接種于裸鼠皮下，結(jié)果顯示，CD90+細(xì)胞CD133+細(xì)胞、CD90-細(xì)胞 CD133+細(xì)胞及 CD133-細(xì)胞 CD90+細(xì)胞在裸鼠體內(nèi)均形成腫瘤，且CD90+細(xì)胞CD133+細(xì)胞組在最短時間內(nèi)出現(xiàn)了較高的致瘤能力。而CD133-細(xì)胞CD90-細(xì)胞在整個過程中未見腫瘤形成。將裸鼠體內(nèi)的腫瘤經(jīng)HE染色，其結(jié)果與人肝癌組織病理特點(diǎn)相似。
　　結(jié)論：