兔脂肪組織來(lái)源干細(xì)胞分離培養(yǎng)方法與鑒定.pdf

1、目的：建立一種簡(jiǎn)單高效的兔脂肪組織來(lái)源干細(xì)胞(adipose-derived stem cells，ADSCs)的體外分離培養(yǎng)方法，使在兔模型中脂肪組織來(lái)源干細(xì)胞的提取方法更加簡(jiǎn)便而且高效，為組織工程提供充足的干細(xì)胞來(lái)源。
　　方法：兔麻醉后在無(wú)菌條件下分離兔腹股溝皮下脂肪組織，剪碎成脂肪顆粒后采用0.1％I型膠原酶37℃恒溫條件下震蕩消化，用含10％胎牛血清(FBS)及1％雙抗（青霉素、鏈霉素）的高糖基礎(chǔ)培養(yǎng)基(DMEM)在細(xì)胞

2、培養(yǎng)箱中進(jìn)行貼壁培養(yǎng)兔ADSCs，并對(duì)其細(xì)胞的形態(tài)、體外增殖能力進(jìn)行觀察統(tǒng)計(jì)，繪制細(xì)胞增殖曲線，并對(duì)其經(jīng)過(guò)誘導(dǎo)，對(duì)其成骨、成脂肪、成軟骨能力的分化及表面標(biāo)記基因表達(dá)進(jìn)行分析研究。
　　結(jié)果：此方法在體外分離培養(yǎng)的兔ADSCs具有良好的細(xì)胞形態(tài)和極強(qiáng)的增殖能力，經(jīng)誘導(dǎo)分化，其具有成脂。成軟骨及成骨分化潛能，兔第三代ADSCs表面標(biāo)記CD34、CD105陽(yáng)性，Sca-1高表達(dá)，不表達(dá)CD45及SSEA-1。
　　結(jié)論：利用兔腹股