不同培養(yǎng)方式對(duì)人肺癌及臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞基因表達(dá)及差異的影響分析.pdf

1、背景與目的：血管新生(angiogenesis)是腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的重要病理基礎(chǔ)和條件。實(shí)體瘤的生長(zhǎng)取決于腫瘤細(xì)胞和腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞這兩類細(xì)胞的相互作用。那么在活體內(nèi)的腫瘤內(nèi),血管內(nèi)皮細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞相互作用是否會(huì)改變兩種細(xì)胞的基因表達(dá)、從而影響腫瘤生長(zhǎng)及其血管生成呢?為探討兩種細(xì)胞在生長(zhǎng)中的相互作用機(jī)制、并最大程度地模擬體內(nèi)腫瘤生長(zhǎng)及血管生成狀態(tài),本研究在體外建立了臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞HUVEC與人肺腺癌細(xì)胞株LTEP-A-2的體外細(xì)胞共培養(yǎng)體

2、系、以此環(huán)境模擬了研究體血管內(nèi)皮細(xì)胞與肺癌細(xì)胞的相互作用,并采用博奧公司22K人類全基因組寡核苷酸芯片檢測(cè)了混合培養(yǎng)狀態(tài)下兩種細(xì)胞基因表達(dá)、以Real time-PCR驗(yàn)證了芯片結(jié)果的準(zhǔn)確性。生物信息學(xué)分析其生物學(xué)作用,以圖研討兩種細(xì)胞在腫瘤血管生成過程中的互相影響,為探索抗血管生成治療機(jī)制、選擇臨床最佳治療方案提供理論參考和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：
　　 1建立人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞HUVEC和人肺癌細(xì)胞LTEP-A-2

3、的體外混合培養(yǎng)體系。
　　 2活細(xì)胞計(jì)數(shù)及MTT比色法研究混合培養(yǎng)及單獨(dú)培養(yǎng)狀態(tài)下的臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞HUVEC和肺癌細(xì)胞LTEP-A-2的生長(zhǎng)狀況。
　　 3利用流式細(xì)胞儀對(duì)混合培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行分選。
　　 4應(yīng)用基因芯片技術(shù)分析兩種細(xì)胞在混合培養(yǎng)狀態(tài)下與單獨(dú)培養(yǎng)狀態(tài)下基因表達(dá)的差異,同時(shí)應(yīng)用:RT-PCR方法驗(yàn)證。
　　 結(jié)果：
　　 1.以基因芯片結(jié)果為基礎(chǔ),在混合培養(yǎng)HUVEC細(xì)胞組共檢測(cè)到155

4、8個(gè)差異表達(dá)基因,表達(dá)上調(diào)1176個(gè)；下調(diào)382個(gè)；混合培養(yǎng)LTEP-A-2細(xì)胞組共檢測(cè)到1442個(gè)差異表達(dá)基因,表達(dá)上調(diào)762個(gè)、下調(diào)680個(gè)。
　　 2.觀察到了6個(gè)存在基因顯著表達(dá)差異的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路:P53、MAPK、VEGF、TGF-beta、Jak-STAT、PPAR。
　　 3.通過應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(real-timequantitativePCR)技術(shù)對(duì)篩選出的差異表達(dá)基因進(jìn)行檢測(cè),與基因芯片結(jié)果一致