胎兒胸腺內(nèi)CD80和CEA的表達及定位.pdf

1、背景 胸腺是T細胞發(fā)育最適宜的微環(huán)境。T細胞在胸腺內(nèi)發(fā)育成熟需要經(jīng)歷嚴格的陽性選擇和陰性選擇。胸腺細胞的陰性選擇不僅需要胸腺細胞的TCR信號，還需要胸腺細胞與抗原遞呈細胞(antigen presenting cell，APC)表面結(jié)合提供第二信號(自身肽-MHC分子)的共刺激分子。共刺激信號在陰性選擇中發(fā)揮必要的作用。共刺激信號可以增強也可以終止免疫應(yīng)答，即也具有免疫調(diào)整作用。已證實B7-1(CD80)與CD28是最基本的共刺

2、激分子。胸腺內(nèi)B7-1主要表達于樹突狀細胞(dendriticcell，DC)、巨噬細胞和某些網(wǎng)狀上皮細胞(epithelioreticlar cells，ERC)上。 依據(jù)分布和功能廣義的胸腺上皮細胞可分為6型，其中包含有狹義的網(wǎng)狀上皮細胞和樹突狀細胞(又名為交錯突細胞)，皆可表達CD80。現(xiàn)今認為DC是功能最強大的抗原遞呈細胞(antigen presenting cell，APC)，它呈遞抗原的能力是巨噬細胞的100-10

3、00倍。 癌胚抗原(carinoembryonic antigen，CEA)是一種分子量約為180 kDa的糖蛋白分子，胚胎時期的正常表達分泌，對胚胎的發(fā)育、組織形成具有重要的作用。臨床上，CEA已用于相關(guān)腫瘤的檢測和治療。關(guān)于胸腺細胞發(fā)育成熟的規(guī)律和胸腺基質(zhì)細胞對其調(diào)節(jié)作用及分子機制研究等，多是以動物胸腺為研究對象。目前關(guān)于CD80及CEA分子在胎兒胸腺的表達定位的研究國內(nèi)外尚未見報道。本研究應(yīng)用胎兒胸腺組織冰凍切片的HE染色

4、、ANAE(α-naphthyl acidic esterase，α-萘酚酸性酯酶)組化染色、CD80和CEA免疫組化染色，并用Trizol法提取胎兒胸腺蛋白質(zhì)，以Western blotting和ELISA技術(shù)分別對早期、晚期胎兒胸腺觀察了早期、晚期胎兒的CDSO和CEA免疫反應(yīng)性(immunoreactivity，IR)的表達和分布情況。材料與方法1.取孕婦自愿提供的意外懷孕、水囊引產(chǎn)的胎兒12例，包含早期胎兒胸腺3-4個月的4例(

5、Ⅰ組)和晚期胎兒胸腺的5-8個月的8例(Ⅱ組)。 2.將標本等分為兩份，一份制備冰凍組織切片，進行常規(guī)HE染色、ANAE組織化學(xué)染色、CD80和CEA免疫組織化學(xué)染色，油鏡下各觀察其信號定位。 3．另一份標本以Trizol提取蛋白質(zhì)進行Western blotting和CEA-ELISA檢測，用．Shimadu薄層層析掃描儀掃描CD80及β-actin條帶的OD值，計算早期胎兒胸腺和晚期胎兒L胸腺的CD80/β-acti

6、n的比值；用酶標儀檢測兩組胎兒胸腺CEA含量的OD值。 3．應(yīng)用SPSS 10.0軟件，進行ANOVA統(tǒng)計學(xué)分析，以α=0.05檢測兩組間差異顯著性。 結(jié)果 1 HE染色早期胎兒胸腺體積較小，皮質(zhì)和髓質(zhì)發(fā)育差，髓質(zhì)網(wǎng)孔空隙較小。晚期胎兒胸腺體積較大，皮質(zhì)和髓質(zhì)逐漸發(fā)育，髓質(zhì)的網(wǎng)孔空隙較大。晚期標本胸腺髓質(zhì)內(nèi)可見典型的哈氏小體(Hassali's corpuscle)。 2 CD80免疫組化染色CD80免疫

7、反應(yīng)性(immunoreactivity，IR)CDBO-IR呈棕色細顆粒，廣義的網(wǎng)狀上皮細胞(epithelioreticlar cells，ERC)均呈CDSO陽性反應(yīng)。早期胎兒胸腺CDSO-IR細胞不顯著；晚期胎兒胸腺CD80-IR細胞明顯增多，且髓質(zhì)內(nèi)顯著多于皮質(zhì)。ERC可分為6型：①Ⅰ型ERC：定位于皮質(zhì)，網(wǎng)狀上皮細胞呈扁平狀，位于被膜和小梁的內(nèi)面；②Ⅱ型ERC：分布于皮質(zhì)內(nèi)，細胞呈小星形，突起也很少；③Ⅲ型及Ⅳ型ERC：呈扁

8、平狀，定位于皮質(zhì)髓質(zhì)交界處；④Ⅴ型ERC：分布于髓質(zhì)內(nèi)，細胞呈大星形狀，突起多且細長；⑤Ⅵ型ERC：位于髓質(zhì)內(nèi)哈氏小體。 3 ANAE染色已知ANAE組化染色可標記T淋巴細胞及其亞型。胸腺成熟T細胞可分為點樣型(代表CD4<'+>)和散粒型(代表CD8<'+>)。點樣型細胞內(nèi)可見1-3個邊界清楚的深紅色小點。散粒型細胞內(nèi)呈多數(shù)彌散小顆粒。早期胎兒胸腺標本ANAE標記細胞不明顯；晚期胎兒胸腺髓質(zhì)內(nèi)ANAE染色的CD4<'+>或CD

9、8<'+>細胞各呈叢狀分布。胎兒胸腺髓質(zhì)內(nèi)哈氏小體及巨噬細胞ANAE染色呈強陽性的火焰型。 4．CEA免疫組化染色早期胎兒胸腺內(nèi)CEA免疫反應(yīng)陽性定位于髓質(zhì)網(wǎng)狀上皮細胞和哈氏小體。晚期胎兒胸腺髓質(zhì)內(nèi)CEA免疫反應(yīng)陽性更強，多集中于哈氏小體。 5 Western Blotting早期胎兒胸腺CD80與β-actin的OD比值為0．66±0.09。晚期胎兒胸腺CD80與β-actin的OD比值為0．89±0．11。兩組相比較，差異具

10、有顯者性，p<0.05。 6．ELISA法檢測CEA 早期胎兒胸腺蛋白提取液中CEA含量的OD值為0．181±0.03，晚期胎兒胸腺蛋白提取液中CEA含量的OD值為0．302±0.04，兩組相比較，差異具有顯著性，p<0.05。 結(jié)論 1．晚期胎兒胸腺標本的CD80免疫印跡和CEA-ELISA的檢測值均顯著高于早期胎兒。這表明晚期胎兒胸腺的CD80及CEA表達水平顯著高于早期胎兒的胸腺。 2．早期胎兒胸腺

11、發(fā)育差。晚期胎兒胸腺內(nèi)CD80免疫反應(yīng)性細胞依據(jù)分布可分為6型，其中Ⅰ型ERC，Ⅲ型及Ⅳ型ERC均具有隔離屏障作用。皮質(zhì)內(nèi)Ⅱ型ERC和位于髓質(zhì)內(nèi)Ⅴ型ERC皆為狹義的DC。Ⅵ型ERC定位于哈氏小體。這提示胸腺微環(huán)境又可分隔為若干亞微環(huán)境。 3．早期組CEA陽性分布于髓質(zhì)上皮細胞和哈氏小體，晚期組CEA陽性更集中于哈氏小體。哈氏小體的CEA-IR結(jié)合CD80-IR以及ANAE強陽性染色，這提示哈氏小體可具有一定的生物學(xué)功能。