血管緊張素轉(zhuǎn)化酶2在心肌缺血再灌注損傷中的表達(dá)及氯沙坦預(yù)處理的影響.pdf

1、本文主要就血管緊張素轉(zhuǎn)化酶2在心肌缺血再灌注損傷中的表達(dá)及氯沙坦預(yù)處理的影響進(jìn)行了研究，文章內(nèi)容如下： 第一部分：血管緊張素轉(zhuǎn)化酶2在心肌缺血再灌注損傷中的表達(dá)意義。 目的：(1)研究大鼠心肌缺血再灌注損傷缺血1h、12h后血管緊張素轉(zhuǎn)換酶2(ACE2)蛋白、血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)表達(dá)水平；(2)給大鼠灌胃氯沙坦14天藥理性預(yù)處理后，再建立大鼠心肌缺血30分鐘再灌注1h、12h損傷模型，繼續(xù)觀察內(nèi)臟組織ACE2蛋白，動

2、脈血漿及心肌組織AngⅡ水平的變化；同時記錄各組心電圖QT間期及ST段變化情況；(3)通過氯沙坦藥物性預(yù)處理，探討心肌缺血再灌注損傷中血管緊張素Ⅱ受體阻滯劑(ARB)藥物治療效應(yīng)的機制及ACE2蛋白在心肌缺血性疾病中表達(dá)的意義。 方法：(1)24只15周齡雄性SD大鼠隨機分為心肌缺血30min再灌注1h、12h心肌缺血再灌注損傷兩組(MIRI1h、MIRI12h，每組12只)。同時取12只15周齡雄性SD大鼠為假缺血再灌注損傷組

3、(Sham)。經(jīng)氯沙坦藥物性預(yù)處理，再建立再灌1h、12h兩組(Loa1h、Los12h，每組12只)：每只大鼠以胃灌服氯沙坦5mg/Kg.day，給藥14天；余各組給予等量蒸餾水灌胃。每天早8:00～9:00給藥，每天通過稱體重調(diào)整藥物用量。結(jié)扎冠狀動脈左前降支缺血30min，分別再灌注1h、12h后取大鼠腹主動脈血經(jīng)過離心獲得血漿：經(jīng)4％多聚甲醛心肌再灌注內(nèi)固定后，取心肌、腎臟、睪丸及肝臟等組織，再經(jīng)4％多聚甲醛浸泡外固定，備行病理

4、學(xué)檢查；不經(jīng)4％多聚甲醛再灌的大鼠，直接取新鮮心肌組織，備測AngⅡ指標(biāo)。(2)使用HE常規(guī)染色方法觀察大鼠動物內(nèi)臟器官病理學(xué)鏡下變化；(3)用放射免疫法測定血漿及心肌組織中AngⅡ含量；(4)免疫組化方法半定量測試積分光密度值(IOD)，比較各組大鼠心臟、腎臟、睪丸等組織中ACE2的表達(dá)情況；(5)同步心電圖監(jiān)測模型動物組及其藥物干預(yù)動物組心律失常發(fā)生及ST段變化情況。 結(jié)果： (1)與Sham組比較，心肌缺血1h再灌注組心肌

5、損傷區(qū)、肝臟ACE2表達(dá)不明顯，而腎小管上皮細(xì)胞、睪丸組織中ACE2表達(dá)增多；與MIRI1h組比較，心肌缺血12h組缺血心臟組織ACE2表達(dá)開始增多，腎臟表達(dá)有所下降：而肝臟等組織幾乎不表達(dá)，睪丸組織表達(dá)增多不明顯。(2)氯沙坦干預(yù)再灌注1h組，腎小管上皮細(xì)胞ACE2蛋白表達(dá)較MIRI12h組明顯(P<0.05)，心臟、睪丸ACE2蛋白表達(dá)增多不明顯；氯沙坦干預(yù)再灌注12h組，與單純再灌注MIRI12h比較，腎臟、睪丸ACE2蛋白表達(dá)增

6、多不明顯，而心臟ACE2蛋白表達(dá)有所上調(diào)(P<0.05)。(3)與缺血再灌注組比較，氯沙坦藥物干預(yù)組心肌及血漿Ang Ⅱ含量均無統(tǒng)計學(xué)差別；而心肌缺血再灌注早期心肌組織與假手術(shù)組比較有統(tǒng)計學(xué)差別(P<0.05)。(4)心肌缺血1h再灌注損傷組：心律失常發(fā)生率、ST段變化均高于心肌缺血12h再灌注損傷組；經(jīng)氯沙坦藥物預(yù)處理后，MIRI1h心律失常發(fā)生率下降不明顯，但MIRI12h心律失常發(fā)生率下降。 結(jié)論： (1)心肌缺血再灌注區(qū)

7、ACE2表達(dá)上調(diào)出現(xiàn)于再灌注晚期，可能與延遲性再灌注損傷有關(guān)。(2)氯沙坦可促進(jìn)心肌缺血再灌注區(qū)ACE2的表達(dá)增多，可能對心肌缺血再灌注組織中的ACE2蛋白分泌起到促進(jìn)與加強作用。(3)缺血再灌注早期不能立即刺激心肌區(qū)ACE2蛋白表達(dá)增多；但遠(yuǎn)隔器官腎臟、睪丸有表達(dá)，特別是在血管緊張素Ⅱ受體阻滯劑(ARB)氯沙坦藥物干預(yù)下，腎臟ACE2的表達(dá)有所上調(diào)。(4)MIRI可致室性心律失常，而氯沙坦具有抗心律失常作用，可能通過延長QT間期和抑制

8、ST段的抬高變化來實現(xiàn)。 第二部分：氯沙坦藥物性預(yù)處理對心肌缺血再灌注損傷血管緊張素轉(zhuǎn)化酶2表達(dá)的影響及意義。 目的：(1)建立改良心肌缺血再灌注損傷模型后，分別觀察心肌缺血30min再灌注1h、3h、6h、9h、12h大鼠動脈血血漿及心肌血管緊張素Ⅱ(Ang Ⅱ)、內(nèi)臟組織血管緊張素轉(zhuǎn)換酶2(ACE2)水平的變化；(2)觀察大鼠心肌缺血30min后不同再灌時期血漿及心肌AngⅡ、內(nèi)臟ACE2蛋白水平，比較不同部位ACE

9、2的表達(dá)水平，探討心肌缺血再灌注損傷中ACE2蛋白在心肌缺血性疾病中表達(dá)的意義。(3)記錄心肌缺血再灌注各組心電圖室性心律失常的發(fā)生率及ST段的變化，初步探討QT間期與心律失常的發(fā)生及ACE2的相關(guān)性。 方法：(1)50只15周齡雄性SD大鼠隨機分為心肌缺血30min再灌注1h、3h、6h、9h、12h心肌再灌注損傷模型(MIRI1h，MIRI3h，MIRI6h，MIRI9h，MIRI12h)5組(各組10只)。同時取10只15

10、周齡雄性SD大鼠心臟只穿線不結(jié)扎作為假缺血再灌注組(Sham)。結(jié)扎冠脈30min后再灌注1h、3h、6h、9h、12h后取各組大鼠腹主動脈血，經(jīng)過離心獲得血漿，再經(jīng)4％多聚甲醛心肌再灌注，后取心肌、腎臟、睪丸及肝臟等組織，備行病理學(xué)檢查；未經(jīng)4％多聚甲醛心肌再灌注的老鼠，直接取新鮮心臟組織，備放免法測心肌AngⅡ指標(biāo)。(2)使用HE常規(guī)染色方法觀察大鼠動物內(nèi)臟器官病理學(xué)鏡下變化；(3)用放射免疫法測定動脈血漿及心肌組織中AngⅡ的含量

11、；(4)免疫組化方法半定量測定積分光密度值(IOD)，比較各組大鼠心臟、腎臟、睪丸等組織中ACE2的表達(dá)情況；(5)同步心電圖監(jiān)測各組大鼠室性心律失常發(fā)生及ST段變化情況。 結(jié)果：(1)與心肌缺血再灌注其他各組相比，MIRI12h組心肌損傷區(qū)ACE2表達(dá)開始增多(P<0.05)，而腎臟表達(dá)有所下降，肝臟幾乎不表達(dá)，睪丸ACE2表達(dá)增多不明顯；(2)與Sham組比較，MIRI1h組腎小管上皮細(xì)胞、睪丸組織ACE2表達(dá)增多(P<0.

12、05)，而肝臟、心臟等組織幾乎不表達(dá)；(3)與Sham組比較，各缺血再灌注組心肌損傷區(qū)及血漿AngⅡ含量有統(tǒng)計學(xué)差別(P<0.05)，而未缺血再灌注心肌AngⅡ各組表達(dá)水平接近。(4)心肌缺血再灌注時間越早，發(fā)生室性心律失常的機會及ST段的變化越明顯；室性心律失常的發(fā)生與QT間期縮短有關(guān)。(5)心肌缺血再灌注時間延長時，QT間期有所延長，心律失常發(fā)生率下降。 結(jié)論：(1)缺血缺氧可引起ACE2蛋白分泌增多。(2)心肌缺血再灌注區(qū)

13、ACE2表達(dá)上調(diào)出現(xiàn)于再灌注晚期，可能與延遲性再灌注損傷有關(guān)；心肌缺血組織AngⅡ含量與ACE2蛋白水平非線性相關(guān)，可能有別的因素干擾或有新的代謝通路。(3)缺血缺氧不能立即刺激心肌缺血區(qū)；但遠(yuǎn)隔器官腎臟、睪丸ACE2的表達(dá)有所上調(diào)。ACE2可能主要由局部腎臟自分泌產(chǎn)生，通過代謝產(chǎn)生血管緊張素(1-7)[Angiotensin(1-7)]參與抗缺血缺氧、保護(hù)受損器官效應(yīng)。(4)未見肝臟ACE2蛋白表達(dá)，表明此種蛋白分泌具有組織器官的特異