結(jié)核分枝桿菌北京家族多重耐藥菌株CCDC5180、藥物敏感菌株CCDC5079與BCG的蛋白質(zhì)組學(xué)初步研究.pdf

1、結(jié)核分枝桿菌(MTB)是影響人類健康的主要病原體之一，北京家族(Beijing family)是造成我國結(jié)核病傳播的主要基因型。多耐藥菌株CCDC5180、敏感菌株CCDC5079是從我國流行的北京家族基因型中篩選出的兩株測序株?？ń槊?BCG)是預(yù)防和控制結(jié)核病使用最廣泛的疫苗，但對成人缺乏有效的保護(hù)力。 為從蛋白質(zhì)水平上較全面地了解結(jié)核分枝桿菌北京家族的生物學(xué)特征、耐藥機(jī)制，本研究采用十二烷基磺酸鈉變性聚丙烯酰胺凝膠電泳(S

2、DS-PAGE)、雙向凝膠電泳(2-DE)以及質(zhì)譜(MS)技術(shù)對CCDC5180、CCDC5079與BCG進(jìn)行了蛋白質(zhì)組學(xué)的初步研究。 SDS-PAGE結(jié)果顯示本次分析的三株菌的菌體蛋白圖譜非常相似，有14.4KD- 1182.1KD共40條蛋白條帶，其中14.8KD、23.6KD、66.0KD蛋白的相對表達(dá)量較大，大部分蛋白集中在25.0KD-84.2KD之間，用SDS-PAGE較難發(fā)現(xiàn)兩者間的明顯差異。 為此又進(jìn)行了

3、2-DE圖譜比較，采用商業(yè)的24cm pH4-7(非線性)膠條進(jìn)行第一向分離，第二向分離采用12.5％的聚丙烯酰胺凝膠。經(jīng)硝酸銀染色后發(fā)現(xiàn)它們的2-DE圖譜很相似，在CCDC5180、CCDC5079及BCG菌株的2-DE凝膠上分別檢測到1563、1620、1654個(gè)蛋白質(zhì)斑點(diǎn)，大部分蛋白質(zhì)點(diǎn)等電點(diǎn)分布在pH4.0-pH6.5范圍內(nèi)；銀染分辨率高，但質(zhì)譜鑒定率低下，目前我們只能對2-DE分離菌株的菌體蛋白進(jìn)行膠體考馬斯亮藍(lán)G-250染色

4、，然后進(jìn)行MALDI-TOF-MS和MS/MS質(zhì)譜鑒定。在2-DE考染圖譜上分別檢測到718、767、1019個(gè)蛋白斑點(diǎn)，質(zhì)譜分析整理出了443、436、486個(gè)蛋白點(diǎn)信息，去冗余后最終鑒定了226、149、165種蛋白。通過生物信息學(xué)分析，整理了蛋白質(zhì)組表達(dá)庫，獲得了大部分蛋白相應(yīng)的基因名、編碼框及功能分類等基本信息，并發(fā)現(xiàn)一些數(shù)據(jù)庫中未曾報(bào)道的蛋白，可能是北京家族基因型的特異蛋白，需要進(jìn)一步深入研究。在CCDC5079與CCDC51

5、80菌株的2-DE圖譜差異比較中發(fā)現(xiàn)，有7個(gè)蛋白點(diǎn)表達(dá)豐度增加，4個(gè)蛋白點(diǎn)表達(dá)豐度下降，新增加蛋白5個(gè)，缺失2個(gè);CCDC5079與BCG相比，有5個(gè)蛋白點(diǎn)表達(dá)豐度增加，8個(gè)表達(dá)豐度下降，新增蛋白7個(gè)，缺失3個(gè);CCDC5180菌株BCG相比，4個(gè)蛋白點(diǎn)表達(dá)豐度增加，18個(gè)下降，新增點(diǎn)2個(gè)，缺失4個(gè)。通過對蛋白質(zhì)組表達(dá)庫和圖譜差異蛋白的研究，將更好地了解結(jié)核分枝桿菌的耐藥機(jī)制，為尋找新的藥物靶標(biāo)蛋白、新疫苗構(gòu)建及開發(fā)新的診斷試劑提供理論