結(jié)核分枝桿菌c-di-GMP代謝相關(guān)蛋白的生物化學(xué)研究.pdf

1、結(jié)核病是嚴(yán)重危害人類健康的傳染病，由結(jié)核分枝桿菌(Mycobacteriumtuberculosis，MTB)慢性感染引起，是目前傳染病中僅次于艾滋病的第二號(hào)殺手。到目前為止，包括研究最深入的結(jié)核分枝桿菌菌株H37Rv在內(nèi)的多個(gè)菌株已經(jīng)被測序，為我們進(jìn)行結(jié)核分枝桿菌的生物學(xué)研究，以及發(fā)展新的預(yù)防治療結(jié)核方法提供了良好的基礎(chǔ)。
　　 環(huán)二鳥苷酸(c-di-GMP)是近十余年發(fā)現(xiàn)的細(xì)菌胞內(nèi)第二信使，由二分子cGMP通過3'，5'-磷

2、酸二酯鍵連接而成，在P.aeruginosa、傷寒沙門氏菌(Salmonellatyphimurium)等G-細(xì)菌和S.aureus等G+細(xì)菌中廣泛存在。近年來，隨著微生物基因組的大規(guī)模測序，環(huán)二鳥苷酸(c-di-GMP)吸引了越來越多的關(guān)注。c-di-GMP在細(xì)胞內(nèi)的水平分別受到含GGDEF結(jié)構(gòu)域(二鳥苷酸環(huán)化酶活性)和EAL結(jié)構(gòu)域(磷酸二酯酶活性)蛋白的正向和負(fù)向調(diào)節(jié)，是原核生物中普遍存在的多細(xì)胞行為調(diào)節(jié)因子，通過多種交叉信號(hào)網(wǎng)絡(luò)調(diào)

3、控生物膜形成、耐藥性、毒力因子表達(dá)等生理過程。
　　 在本論文中，我們純化表達(dá)了結(jié)核分支桿菌H37Rv中同時(shí)含有GGDEF結(jié)構(gòu)域和EAL結(jié)構(gòu)域的蛋白R(shí)v1354c及其各個(gè)結(jié)構(gòu)域。通過Radr實(shí)驗(yàn)和體外酶活檢測，我們發(fā)現(xiàn)Rv1354c具有合成c-di-GMP和降解GTP為GDP的能力。通過對(duì)各結(jié)構(gòu)域的體外酶活檢測，我們發(fā)現(xiàn)GAF結(jié)構(gòu)域是該蛋白保持c-di-GMP合成酶能力所必需的；EAL結(jié)構(gòu)域則獨(dú)立具有降解GTP為GDP的能力。體