脊柱后縱韌帶骨化單核苷酸多態(tài)性的基因型特征及其意義的研究.pdf

1、目的：1、通過研究病例組和對照組的4個基因(COL6A1、BMP-2、VDR和Runx2)19個SNP位點基因型及等位基因的分布是否有差異，篩選出與后縱韌帶骨化(ossificationof posterior longitudinal ligament，OPLL)發(fā)生風(fēng)險相關(guān)的SNP位點，即與疾病相關(guān)的功能性SNP位點，初步提出反映后縱韌帶骨化遺傳風(fēng)險度的分子病理學(xué)預(yù)測因子。
　　 2、通過研究病例組Runx2基因的11個SN

2、Ps的基因型及等位基因的分布與后縱韌帶骨化的嚴重程度是否有關(guān)聯(lián)，篩選出與后縱韌帶骨化進展相關(guān)的Runx2基因的SNPs及影響疾病進展的等位基因，初步提出可預(yù)測后縱韌帶骨化進展的分子病理學(xué)因子。
　　 方法：
　　 1、抽取200例受試者(病例組82例，對照組118例)外周血，建立標(biāo)本庫。提取全部樣本DNA并行濃度標(biāo)化，-20℃貯存。選取與骨代謝有關(guān)的4個基因(COL6A1、BMP-2、VDR和Runx2)的19個SNPs

3、，參考文獻及Genebank序列，合成各SNP位點PCR所需的上、下游引物和微測序所需的單堿基延伸引物。經(jīng)PCR擴增后，應(yīng)用Sequenom系統(tǒng)進行SNP基因型檢測。應(yīng)用SPSS軟件以及SNP分析專用軟件MassArray Typer Version3.4對實驗組和對照組各SNP位點基因型、等位基因分布差異以及風(fēng)險相關(guān)臨床病理學(xué)參數(shù)協(xié)同作用進行計算機統(tǒng)計分析處理。
　　 2、抽取82例后縱韌帶骨化患者外周血，建立標(biāo)本庫。提取全部

4、樣本DNA并行濃度標(biāo)化，-20℃貯存。選取與Runx2基因的11個SNP位點，參考文獻及Genebank序列，合成各SNP位點PCR所需上、下游引物和微測序所需的單堿基延伸引物。經(jīng)PCR擴增后，應(yīng)用Sequenom系統(tǒng)進行SNP基因型檢測。應(yīng)用SPSS軟件，對11個SNP位點不同基因型患者的骨化節(jié)段數(shù)進行統(tǒng)計學(xué)分析，篩選與后縱韌帶骨化嚴重性相關(guān)的SNPs及其等位基因。
　　 結(jié)果：
　　 1、在篩選的四個候選基因共19個

5、SNP位點中，等位基因分析沒有發(fā)現(xiàn)與疾病相關(guān)的位點，基因分型差異位點發(fā)現(xiàn)RS1321075 SNP與RS12333172 SNP在疾病組與對照組有顯著差異(P=0.0339，P=0.0428)，連鎖不平衡分析(LD分析)發(fā)現(xiàn)在六號染色體Runx2基因中兩個位點RS12333172、RS1321075基因分型與疾病有顯著相關(guān)，各位點之間有的存在連鎖不平衡關(guān)系； RS967588、RS16873379、RS3749863、RS6908650

6、形成的單倍體CTCG比率為1.75，將有可能增加疾病發(fā)生率。而COL6A1、BMP-2、VDR基因沒有發(fā)現(xiàn)與疾病顯著相關(guān)的多態(tài)性位點。
　　 2、在篩選的Runx2基因的11個SNP位點中， RS1406846 SNP與后縱韌帶骨化的進展有關(guān)。54例含有RS1406846 SNP-A等位基因患者的平均骨化節(jié)段數(shù)為2.8148，28例不含RS1406846 SNP-A等位基因患者的平均骨化節(jié)段數(shù)為3.8571，含有A等位基因患者的

7、骨化節(jié)段數(shù)要明顯少于不含A等位基因的患者，二者差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.042)。
　　 結(jié)論：
　　 1、中國漢族人群中后縱韌帶骨化癥患者Runx2基因的RS1321075 SNP與RS12333172 SNP的變化可能導(dǎo)致OPLL，而COLA1、BMP-2、VDR基因中的多態(tài)性位點未能顯現(xiàn)出與疾病顯著相關(guān)。
　　 2、中國漢族人群Runx2基因的RS1406846 SNP的變化可能會影響后縱韌帶骨化患者骨化節(jié)