FHL2蛋白在牙周膜細(xì)胞礦化過(guò)程中表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:
　　 人牙周膜細(xì)胞(human periodontal ligament cells,hPDLCs)作為牙周組織中的主要的功能細(xì)胞,具有多向分化潛能,包括向成骨細(xì)胞、成牙骨質(zhì)細(xì)胞及成纖維細(xì)胞分化潛能。研究表明許多因子及小分子蛋白能夠調(diào)控牙周膜的分化過(guò)程,在創(chuàng)傷修復(fù)和組織再生中發(fā)揮重要作用。
　　 FHL2屬于LIM蛋白超家族下LIM-only亞類。其中人FHL類蛋白分子結(jié)構(gòu)中僅含有4個(gè)半LIM域,而FHL2是該類

2、研究最深入的成員。目前已知在成骨細(xì)胞中FHL2有高表達(dá),尤其是在骨髓細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化時(shí)表達(dá)量可增加3倍。研究證明FHL2可提高轉(zhuǎn)錄因子Runx2的轉(zhuǎn)錄活性,而Runx2是調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞功能的一個(gè)關(guān)鍵的因子。因此我們推測(cè)FHL2蛋白可能在牙周組織再生中發(fā)揮一定作用。但目前尚未見(jiàn)關(guān)于FHL2對(duì)牙周膜分化影響的報(bào)道。
　　 本研究在體外培養(yǎng)人牙周膜細(xì)胞的基礎(chǔ)上,觀察胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子FHL2蛋白在人牙周膜細(xì)胞體外礦化過(guò)程中的表達(dá),初步探

3、討其在牙周組織再生中可能的作用。
　　 方法:
　　 牙周膜細(xì)胞來(lái)自因正畸需要而拔除的健康前磨牙。利用組織塊法體外培養(yǎng)人牙周膜細(xì)胞。取4～6代細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)組培養(yǎng)液中加入礦化誘導(dǎo)劑,對(duì)照組不加礦化誘導(dǎo)劑。
　　 1.礦化培養(yǎng)0d、14d、28d后,茜素紅染色檢測(cè)礦化結(jié)節(jié)的形成；免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)蛋白水平上FHL2的表達(dá)；
　　 2.同時(shí)采用半定量RT-PCR技術(shù)檢測(cè)礦化0d、14d、28d FHL2

4、mRNA的表達(dá)。SPSS11.0軟件分析結(jié)果。
　　 結(jié)果:
　　 1.牙周膜細(xì)胞培養(yǎng)14天開(kāi)始,礦化組茜素紅染色陽(yáng)性,礦化結(jié)節(jié)形成；未礦化組茜素紅染色陰性。
　　 2.免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果顯示牙周膜細(xì)胞礦化誘導(dǎo)培養(yǎng)14天后FHL2蛋白呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá),對(duì)照組為相對(duì)較弱的陽(yáng)性表達(dá)。
　　 3.RT-PCR顯示牙周膜細(xì)胞礦化誘導(dǎo)0、14、28天相比,均有FHL2 mRNA的表達(dá),其中14天時(shí)表達(dá)最高,約為0天時(shí)的1