抗A族乙型溶血性鏈球菌卵黃抗體的制備及生物活性檢測(cè).pdf

1、乙型溶血性鏈球菌為鏈球菌感染中的主要致病菌,可根據(jù)其細(xì)胞壁中特異性抗原(多糖體)的不同,分為A～H、K～T共18個(gè)族；又根據(jù)其表面蛋白質(zhì)M、K、T、S抗原的不同,將各族細(xì)菌分為若干個(gè)血清型。對(duì)人類(lèi)有致病力者90％為A族(Group Aβ-streptococcus hemolyticus),具有致病性強(qiáng)的特點(diǎn),常引起人類(lèi)和動(dòng)物的多種疾病如皮膚、皮下組織的化膿性炎癥、呼吸道感染、流行性咽炎的爆發(fā)性流行以及新生兒敗血癥、細(xì)菌性心內(nèi)膜炎、猩紅

2、熱和風(fēng)濕熱、腎小球腎炎等變態(tài)反應(yīng)。目前,A族乙型溶血性鏈球菌(Group Aβ-streptococcus hemolyticus)引發(fā)疾病多采用大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素和β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素進(jìn)行治療,但是在當(dāng)前耐藥菌不斷增加的情況下,A族乙型溶血性鏈球菌的藥物敏感性越來(lái)越得到關(guān)注,使得尋找一種安全、高效的抗生素替代品成為一個(gè)亟待解決的問(wèn)題。
　　 特異性卵黃免疫球蛋白(Eggyolk immunoglobulin,IgY)可治療由細(xì)菌或

3、病毒引起的疾病,具有安全無(wú)殘留、不產(chǎn)生抗藥性、服用簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn),是一種具有廣闊應(yīng)用前景的抗生素替代品。本研究以用超聲波破碎法制備的可溶性的A族乙型溶血性鏈球菌(Group Aβ-streptococcus hemolyticus)為抗原,免疫產(chǎn)卵母雞獲得特異性IgY；IgY經(jīng)分離、純化后,考馬斯亮藍(lán)G-250法測(cè)定抗體含量,SDS-PAGE電泳檢測(cè)抗體純度。間接ELISA測(cè)定抗體的效價(jià)。并用瓊脂擴(kuò)散,體外抑菌,免疫熒光等實(shí)驗(yàn)對(duì)特異性IgY

4、在體外對(duì)A族乙型溶血性鏈球菌的生物活性進(jìn)行了研究。
　　 結(jié)果顯示提取的抗體含量平均10.8±0.87 mg／蛋,抗體純度達(dá)92.5％。ELISA測(cè)定抗A族乙型溶血性鏈球菌雞卵黃抗體的效價(jià),于初免后40天左右達(dá)到最高值1:5120,并可持續(xù)30天。抗體在溫度低于75℃、pH4～9具有良好的穩(wěn)定性,抗體在pH為2和3時(shí)經(jīng)過(guò)胃蛋白酶處理短時(shí)間內(nèi)迅速失活,-20℃為其適宜貯藏溫度,且反復(fù)凍融不影響其活性。免疫熒光結(jié)果顯示,特異性IgY