東亞飛蝗體內(nèi)痕量環(huán)腺苷酸的液相色譜分析.pdf

1、環(huán)腺苷酸(3'，5'-cAMP，adenosine3'，5'-cyclicmonophosphate)作為生物體內(nèi)普遍存在的第二信使不論在脊椎動物還是無脊椎動物中都發(fā)揮著重要的生理功能。建立快速靈敏的方法檢測cAMP在生物體內(nèi)的含量是一項非常有意義的研究。 實驗建立了高效液相色譜—熒光檢測器和高效液相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用檢測東亞飛蝗中央神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)內(nèi)cAMP的含量的方法。cAMP用2-氯乙醛衍生化后會有較好的熒光響應(yīng)，用含有TB

2、AS的緩沖鹽和甲醇做流動相，用高效液相色譜連接熒光檢測器檢測，方法的檢測限(LOD)可達到1fmol/ml，精密度實驗的RSD為2.2％。cAMP添加回收率實驗，在10pmol/ml添加濃度下的回收率為100.3±0.6％，在0.1pmol/ml添加濃度下的回收率為88.5％±2.6％，定量限(LOQ)約為0.01pmol/ml。這種非放射性的檢測方法適合檢測昆蟲等小生物樣本體內(nèi)痕量cAMP的含量。高效液相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用檢測cAMP的方

3、法也得到了研究和發(fā)展。比較了離子阱質(zhì)譜正負離子和單級多級模式對檢測方法的影響，最后確定用DMHA作為離子對試劑，用離子阱質(zhì)譜的多級負離子模式檢測。 cAMP信號途徑在生物信號的跨膜傳輸過程中發(fā)揮著重要作用。東亞飛蝗中央神經(jīng)系統(tǒng)中含有章魚胺(OA)受體，章魚胺可以導(dǎo)致腺苷酸環(huán)化酶(ACE)活性增強從而使東亞飛蝗體內(nèi)cAMP含量增加。通過測定生成的cAMP含量可以篩選對章魚胺受體有活性的化合物作為新農(nóng)藥開發(fā)的先導(dǎo)化合物。因為人體不含

4、章魚胺受體，如果以章魚胺受體為靶標開發(fā)新農(nóng)藥，可能會研發(fā)出新一代低毒高效的農(nóng)藥。本文設(shè)計了離體條件下東亞飛蝗中央神經(jīng)系統(tǒng)中的腺苷酸環(huán)化酶反應(yīng)。實驗用這種高效液相色譜的檢測方法測定了章魚胺刺激前后東亞飛蝗中央神經(jīng)系統(tǒng)中cAMP的含量的變化。不加OA刺激，蝗蟲CNS中ACE反應(yīng)的cAMP基礎(chǔ)含量為0.417±0.009pmol/每只，用1mMOA刺激以后，cAMP的含量增加為1.505±0.003pmol/每只。實驗為下一步開發(fā)新型低毒高效