高效液相色譜分析中樣品配制時

1、高效液相色譜分析中樣品配制時誤差產(chǎn)生的主要原因分析劉保健劉宇杰楊麗燕金永亮(西安建筑科技大學(xué)環(huán)境與市政工程學(xué)院陜西西安市710055)【摘要摘要】本文主要分析了高效液相色譜分析中標(biāo)準(zhǔn)樣品配制及樣品預(yù)處理時誤差產(chǎn)生的主要原因，以及為了得到精確的實驗結(jié)果，減小實驗誤差采取的相應(yīng)措施。關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞：高效液相色譜誤差樣品配制1前言高效液相色譜(highperfmanceliquidchromatogramHPLC)的發(fā)展始于20世紀(jì)60年代中后

2、期，它是在經(jīng)典液相色譜的基礎(chǔ)上，引入氣相色譜的理論和技術(shù)發(fā)展起來的分離分析手段，隨著高效液相色譜儀器功能的不斷改進，高效液相色譜技術(shù)已經(jīng)發(fā)展為廣泛應(yīng)用于化學(xué)、藥學(xué)、醫(yī)學(xué)、生物化學(xué)和環(huán)境科學(xué)等研究領(lǐng)域的重要的分離分析技術(shù)。高效液相色譜定量分析過程可分為樣品的預(yù)處理、標(biāo)準(zhǔn)樣品的配制、檢測及數(shù)據(jù)處理等六個步驟。隨著現(xiàn)在市場銷售儀器自動化程度的提高，加樣、分離、檢測及數(shù)據(jù)處理等實驗環(huán)節(jié)對實驗結(jié)果產(chǎn)生的誤差越來越小，尤其在高效液相色譜定量分析中，

3、實驗結(jié)果的誤差可能主要來源于標(biāo)準(zhǔn)樣品的配置及樣品的前處理，本文僅就標(biāo)準(zhǔn)樣品配制及樣品的前處理時誤差產(chǎn)生的主要原因以及減小誤差產(chǎn)生采取的主要措施進行分析。2實驗本文中討論的問題帶有普遍性，其中論及的實驗部分適用于所有市場銷售HPLC儀器，影響高效液相色譜分析結(jié)果準(zhǔn)確性的因液的儲存中溶劑的揮發(fā)，被測成分的氧化及分解也是不能忽視的因素，為了減少溶劑的揮發(fā)及被測組分的變化，標(biāo)樣應(yīng)該盡可能盡快使用，儲存標(biāo)樣應(yīng)盡可能低溫避光。例如硝酸銀和部分亞硝酸

4、鹽受光熱的影響很大，使用硝酸銀和部分亞硝酸鹽作標(biāo)準(zhǔn)溶液，第一應(yīng)該盡可能使用新配置的，第二在儲存中要將它們放在深色的容器中，在低溫避光下儲存。玻璃容器對被測組分的吸收對結(jié)果的誤差是一個很不確定的因素分析這方面的影響需要長期的實驗數(shù)據(jù)積累，表1中所列的各種因素和采取的措施參照了日本島津公司發(fā)表的相關(guān)內(nèi)容，對于從事相關(guān)方面研究的研究人員具有一定的參考意義。3樣品的前處理樣品的萃取率是樣品前處理時存在的主要問題。當(dāng)固液萃取（含柱分離的前處理方法

5、），液液萃取時，存在萃取率不高且不穩(wěn)定的問題。尤其在除去蛋白質(zhì)時，存在變性蛋白質(zhì)會吸附一些被測組分，導(dǎo)致萃取率降低的情況。通常，萃取率是通過在式樣中添加被測成分在萃取的方法評價的。也就是說，被測成分的增加量和液相色譜中的峰面增大成比例關(guān)系，通過這種方法可以確定溶液中被測成分的變化趨勢。表1容器對被測成分的吸附材料容易被吸附成分舉例抑制吸附需要加入的溶劑玻璃陽離子（季銨鹽，金屬離子）胺氮的孤電子對可與氫結(jié)合減小pH值添加過氯酸離子加入可結(jié)

6、合的離子金屬陰離子，形成螯合物的成分（α醇酸，β雙酮托酚酮）根據(jù)具體情況采取減小pH值，加入可結(jié)合的離子等方法，添加金屬絡(luò)合劑合成樹脂疏水性高的成分減小極性如果存在萃取率不穩(wěn)定的問題，就有必要改變萃取的方法，要預(yù)先添加內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)然后萃取。這種情況采用的內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，必須與被測物質(zhì)的化學(xué)結(jié)構(gòu)類似，萃取的萃取率才可能相近。如果回收率不但接近100%而且較為穩(wěn)定，可以證明這種前處理方法較為可靠。在分析中如果能充分考慮以上誤差產(chǎn)生的各種原因，