雙功能分子影像探針標(biāo)記的內(nèi)皮祖細(xì)胞在腫瘤血管新生中的活體成像.pdf

1、第一部分：
　　目的：探討大鼠骨髓內(nèi)皮祖細(xì)胞(endothelial progenitor cells，EPCs)體外分離、培養(yǎng)和擴(kuò)增的方法，對(duì)培養(yǎng)的EPCs進(jìn)行鑒定。觀察雙功能分子影像探針Conjugate1的細(xì)胞標(biāo)記情況。
　　方法：取大鼠肱骨和股骨骨髓，密度梯度離心法分離單個(gè)核細(xì)胞，篩選出貼壁細(xì)胞，傳代培養(yǎng)。通過(guò)分析細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞表面標(biāo)志物等方法鑒定EPCs。將新型順磁性/近紅外熒光探針Conjugate1與EPCs在

2、體外共同孵育，觀察探針標(biāo)記情況。
　　結(jié)果：大鼠骨髓懸液分離得到單個(gè)核細(xì)胞，體外培養(yǎng)后表現(xiàn)出內(nèi)皮細(xì)胞典型的“鋪路石”形態(tài)。細(xì)胞傳代四次后能夠內(nèi)吞乙?；兔芏戎鞍?ac-LDL)、結(jié)合凝集素-1(UEA-1)，具有內(nèi)皮細(xì)胞功能。P4代細(xì)胞表達(dá)EPCs表面標(biāo)志物CD34、CD133、vWF、VEGFR-2，而成熟內(nèi)皮細(xì)胞表面標(biāo)志物CD31表達(dá)較弱。P4代EPCs能夠較好地吞噬雙功能分子影像探針Conjugate1，探針標(biāo)記率高達(dá)(9

3、6.7±2.6)％。
　　結(jié)論：通過(guò)密度梯度離心法可以得到具有干細(xì)胞特性的大鼠骨髓EPCs，這些EPCs具有分化增殖能力。新型雙功能分子影像探針Conjugate1的EPCs標(biāo)記率較高。
　　第二部分
　　目的：內(nèi)皮祖細(xì)胞(endothelial progerlitor cells，EPCs)對(duì)腫瘤新生血管有重要意義。利用它的歸巢特性，EPCs可被用作腫瘤靶向成像。本實(shí)驗(yàn)使用含有近紅外熒光染料Cy5.5和磁共振T1陽(yáng)性

4、對(duì)比劑Gd的雙功能分子影像探針Conjugate1對(duì)荷瘤鼠體內(nèi)移植的EPCs進(jìn)行活體示蹤和腫瘤成像，驗(yàn)證EPCs在腫瘤中的成血管作用，探討EPCs對(duì)腫瘤及新生血管生長(zhǎng)的作用。
　　方法：分離培養(yǎng)大鼠骨髓EPCs，將標(biāo)記或未標(biāo)記Conjugate1的EPCs經(jīng)心臟移植入人乳腺癌MDA-MB-231荷瘤鼠體內(nèi)。按多個(gè)時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行活體磁共振成像，通過(guò)T1加權(quán)像觀察EPCs的歸巢現(xiàn)象，T1 map測(cè)算T1弛豫時(shí)間，通過(guò)T2加權(quán)像計(jì)算腫瘤體積

5、。按設(shè)計(jì)的時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行活體光學(xué)成像，觀察腫瘤信號(hào)改變。動(dòng)物處死后取出腫瘤及肝臟、脾臟、腎臟、肺組織進(jìn)行離體光學(xué)成像，觀察EPCs在各器官的分布情況。通過(guò)病理學(xué)方法驗(yàn)證成像結(jié)果，觀察EPCs的分化和成血管作用，計(jì)算腫瘤微血管密度。使用電感耦合等離子體質(zhì)譜儀測(cè)量以上組織Gd含量。
　　結(jié)果：移植Conjugate1標(biāo)記的EPCs后，磁共振T1加權(quán)像可以觀察到腫瘤內(nèi)不均勻高信號(hào)，T1弛豫時(shí)間顯著降低。在三周觀測(cè)期內(nèi)，EPCs移植對(duì)腫瘤體積