RF-6A細(xì)胞在不同氧濃度下的缺氧誘導(dǎo)因子-1α的表達(dá)和活性氧水平.pdf

1、目的：眼球新生血管發(fā)生是導(dǎo)致視力下降甚至失明的重要原因。糖尿病視網(wǎng)膜病變、年齡相關(guān)性黃斑變性以及早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病都會(huì)引起視網(wǎng)膜的新生血管，繼而導(dǎo)致視力障礙。大量文獻(xiàn)表明，視網(wǎng)膜組織缺血缺氧，缺氧誘導(dǎo)因子1α(hypoxia-inducible factor-1α，HIF-1α)蛋白降解減少，上調(diào)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascularendothelial growth factor，VEGF)表達(dá)是新生血管發(fā)生的基礎(chǔ)。因此，HIF-1α與氧濃

2、度關(guān)系密切。雖然動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中通過(guò)高濃度氧處理后誘導(dǎo)視網(wǎng)膜新生血管模型已經(jīng)普遍應(yīng)用，HIF-1α與高濃度氧的直接關(guān)系卻未明確。有文獻(xiàn)報(bào)道高濃度氧條件下視網(wǎng)膜組織凋亡，視網(wǎng)膜血管阻塞，VEGF受體下調(diào)，從而促血管生成因子與抗血管生成因子平衡破壞。該平衡被破壞，導(dǎo)致新生血管的產(chǎn)生。同時(shí)，高濃度氧產(chǎn)生過(guò)多的活性氧，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。我們將視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞置于不同氧濃度環(huán)境下檢測(cè)缺氧誘導(dǎo)因子-1α表達(dá)及活性氧水平，探討氧濃度，活性氧和HIF-1α三者

3、之間的相互聯(lián)系。 方法：將RF/6A細(xì)胞置于常氧21％O2、低氧1％O2以及高氧95％O2條件下，同時(shí)添加活性氧處理組，即細(xì)胞滴加0.3％過(guò)氧化氫1.5ml后放置常氧條件下。4組各孵育3h，取出后利用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)其HIF-1α表達(dá)，使用活性氧檢測(cè)試劑盒觀察活性氧水平。 結(jié)果： 1．各組HIF-1α蛋白表達(dá)：低氧組、高氧組及活性氧組HIF-1α表達(dá)明顯，棕黃色著色主要沉著于細(xì)胞胞漿，高氧組細(xì)胞胞核也可見(jiàn)著色

4、。經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析示低氧組、高氧組及活性氧組HIF-1α表達(dá)明顯高于常氧組(P＜0.01)且前三組之間無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。 2．各組活性氧測(cè)定：低氧組、常氧組未見(jiàn)明顯熒光，高氧組及活性氧組胞質(zhì)熒光顯色明顯。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，高氧組與活性氧組、低氧組與常氧組活性氧水平無(wú)明顯差異(P＞0.05)，其余各組間均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01)。 結(jié)論：相較常氧濃度條件，高氧濃度下細(xì)胞內(nèi)HIF-1α表達(dá)增多；相較低氧及常氧濃度條

5、件，高氧濃度下活性氧水平增高?；钚匝跛脚cHIF-1α表達(dá)存在相關(guān)性。外源性活性氧也可增加HIF-1α的表達(dá)。高氧濃度下HIF-1α表達(dá)增高可能是基于胞內(nèi)增多的活性氧所致，HIF-1α的穩(wěn)定性及其活性與細(xì)胞內(nèi)部活性氧水平相關(guān)，細(xì)胞內(nèi)活性氧水平可能是作為體內(nèi)氧濃度環(huán)境改變的感受器，通過(guò)PI3K/Akt及MARK途徑影響HIF-1α的表達(dá)，從而引起機(jī)體一系列針對(duì)氧濃度變化的效應(yīng)。因此，進(jìn)一步了解高氧濃度下HIF-1α表達(dá)增多的原因以及非缺氧