LATS2與miRNA-373在人結(jié)直腸癌中表達(dá)及其意義.pdf

1、研究背景和目標(biāo)：
　　 隨著生活習(xí)慣和飲食結(jié)構(gòu)的改變,我國結(jié)直腸癌發(fā)病率高,且呈逐年上升的趨勢(shì),嚴(yán)重威脅著人類身體健康。作為一種復(fù)雜疾病,結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展受到遺傳因素與環(huán)境因素的共同調(diào)控。隨著關(guān)于LATS家族的相關(guān)研究的逐漸深入,人們對(duì)LATS家族在腫瘤調(diào)控,調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)凋亡與衰老,轉(zhuǎn)錄調(diào)控、細(xì)胞遷移等方面發(fā)揮作用的認(rèn)識(shí)也逐步加深;microRNAs是一類長度為19-25個(gè)核苷酸的非編碼小分子RNA,主要通過與靶基因mR

2、NA3’非翻譯區(qū)的完全或不完全匹配,降解靶基因的mRNA或抑制其翻譯,從而參與調(diào)控個(gè)體發(fā)育、細(xì)胞凋亡、增殖及分化等生命活動(dòng)。大量研究表明,miRNAs發(fā)揮著類似于原癌基因或腫瘤抑制基因的功能。
　　 本研究采用免疫組織化學(xué)技術(shù)、逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)、Westernblot等方法檢測LATS2與miRNA-373在大腸癌及癌旁組織中的表達(dá)及分布,探討LATS2與miRNA-373在結(jié)直腸腸癌生長、轉(zhuǎn)移中可能的機(jī)制

3、及作用。
　　 對(duì)象與方法：
　　 一、研究對(duì)象
　　 97例結(jié)直腸癌標(biāo)本及30例正常組織標(biāo)本收集自中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院病理科2010-2011年存檔蠟塊。所有病例術(shù)前未接受放療和化療。男性57例,女性40例;年齡38-94歲(中位年齡61歲).按照UICC制定的腫瘤TNM分期標(biāo)準(zhǔn):Ⅰ期+Ⅱ期65例,Ⅲ期+Ⅳ期32例:組織學(xué)分級(jí)高中低分化級(jí)分別為27例、56例及14例。
　　 為了驗(yàn)證免疫組化結(jié)果,我

4、們另外收集了30例新鮮結(jié)直腸癌及最遠(yuǎn)端切緣的腸粘膜組織(術(shù)后病理予以證實(shí))用于檢測miR-373與LATS2mRNA的表達(dá)情況以及LATS2蛋白的表達(dá)情況。
　　 二、實(shí)驗(yàn)方法
　　 1、應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測LATS2在97例結(jié)直腸癌標(biāo)本及30例正常組織蠟塊中的表達(dá)情況
　　 2、采用RT-PCR技術(shù),檢測30例新鮮結(jié)直腸癌及最遠(yuǎn)端切緣的腸粘膜組織(術(shù)后病理予以證實(shí))中miR-373與LATS2mRNA的表達(dá)

5、情況。
　　 3、采用WesternBlot技術(shù),檢測活體結(jié)直腸癌及最遠(yuǎn)端切緣的腸粘膜組織(術(shù)后病理予以證實(shí))中LATS2蛋白的表達(dá)情況。
　　 4、所有統(tǒng)計(jì)學(xué)運(yùn)算由SPSS17.0forwindows軟件完成,免疫組織化學(xué)計(jì)數(shù)資料組間及組內(nèi)比較采用X2檢驗(yàn),P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。RT-PCR及Westernblot計(jì)量資料用(-x±s),P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：
　　

6、1、免疫組織化學(xué)顯示97例結(jié)直腸癌組織中LATS2蛋白表達(dá)陽性率為36.1%(35/97),明顯低于正常組織的63.3%(19/30),X2=6.962,P=0.008。其表達(dá)與患者年齡,腫瘤位置,結(jié)直腸癌的分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期未見明顯相關(guān)。
　　 2、利用RT-PCR技術(shù)半定量比較各種組織LATS2mRNA水平,其中癌組織與癌旁正常組織具有顯著差異(0.90±0.12vs1.56±0.14)(P＜0.05)。

7、>　　 3、利用RT-PCR技術(shù)半定量比較各種組織miRNA-373水平,其中癌組織與癌旁正常組織具有顯著差異(1.01±0.10vs0.65±0.05)(P＜0.05)
　　 4、通過WesternBlot及灰度掃描發(fā)現(xiàn):癌旁正常組織組中LATS2表達(dá)明顯低于癌組
　　 結(jié)論：
　　 1、LATS2在結(jié)直腸癌中存在低表達(dá);為潛在的抑癌基因,其表達(dá)情況與結(jié)直腸癌臨床病理因素未見明顯相關(guān)。
　　 2、mi