奧美沙坦及遠(yuǎn)程缺血中、后處理對(duì)SHR心肌IR損傷的作用及機(jī)制研究.pdf

1、第一部分奧美沙坦在自發(fā)性高血壓大鼠心肌缺血再灌注損傷中的作用
　　目的:
　　奧美沙坦是一種在臨床中廣泛應(yīng)用的新型血管緊張素Ⅱ受體抑制劑。除降低血壓之外，奧美沙坦兼顧心血管保護(hù)功能。然而，奧美沙坦對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠(Spontaneously hypertensive rat，SHR)的缺血再灌注(Ischemia reperfusion，IR)損傷是否具有保護(hù)作用仍不明確。本部分的主要研究目的在于:1、研究奧美沙坦對(duì)SHR

2、的IR損傷是否具有保護(hù)作用;2、研究服用奧美沙坦對(duì)HMGB1及HIF-1α表達(dá)的影響。
　　方法:
　　40只大鼠隨機(jī)分為兩個(gè)大組:賦形劑(Vehicle)組和奧美沙坦(Olmesartan)組。賦形劑組中除正常飲食外，給予大鼠四周賦形劑（蒸餾水）處理。奧美沙坦組中除正常飲食外，給予大鼠四周奧美沙坦處理。兩組大鼠再被隨機(jī)分配到以下兩個(gè)亞組:偽手術(shù)(Sham)組和缺血再灌注(IR)組。Sham組:縫合線穿過(guò)SHR的左冠狀動(dòng)脈前

3、降支下方，但不阻斷血流;IR組:對(duì)大鼠的左冠狀動(dòng)脈前降支阻斷血流40分鐘后，給予180分鐘再灌注處理。
　　檢測(cè)各組大鼠左室肥厚指數(shù)(Left ventricular mass index，LVMI)、肌酸激酶(Creatine kinase，CK)、缺血和再灌注期間的心率變化、心律失常評(píng)分、梗死面積、HMGB1的蛋白表達(dá)和HIF-1α的mRNA表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　與服用賦形劑的大鼠相比，服用奧美沙坦四周后，大鼠血

4、壓顯著降低，左室肥厚顯著減輕。與Vehicle-sham組相比，Olmesartan-sham組中HMGB1和HIF-1α的表達(dá)顯著降低。與Vehicle-IR組相比，Olmesartan-IR組中梗死面積、CK值以及HMGB1的表達(dá)顯著減少。服用奧美沙坦大鼠中IR損傷引發(fā)的HIF-1α表達(dá)的增加比例大于服用賦形劑大鼠中IR損傷引發(fā)的HIF-1α表達(dá)的增加比例。
　　結(jié)論:
　　基于上述數(shù)據(jù)，本研究首次證實(shí):1、奧美沙坦在S

5、HR中除降低血壓、改善了左室肥厚外，還減輕了心肌IR損傷;2、奧美沙坦能減少HMGB1和HIF-1α的表達(dá);3、奧美沙坦的保護(hù)作用與其抗氧化和抗炎癥的特性有關(guān)。
　　第二部分遠(yuǎn)程缺血中處理在自發(fā)性高血壓大鼠心肌缺血再灌注損傷中的作用
　　目的:
　　遠(yuǎn)程缺血中處理(Remote ischemic perconditioning，RIPER)是減輕缺血再灌注(Ischemia reperfusion，IR)損傷的新策略。

6、然而遠(yuǎn)程缺血中處理在自發(fā)性高血壓大鼠(Spontaneously hypertensive rat，SHR)中是否有效仍不明確。本部分的主要研究目的在于:1、研究RIPER在SHR中是否仍具有保護(hù)作用;2、研究服用奧美沙坦四周是否影響RIPER的保護(hù)作用;3、研究保護(hù)作用是否與HIF-1α，miR-21及miR-210有關(guān)。
　　方法:
　　60只大鼠隨機(jī)分為兩個(gè)大組:賦形劑(Vehicle)組和奧美沙坦(Olmesarta

7、n)組。賦形劑組中除正常飲食外，給予大鼠四周賦形劑（蒸餾水）處理。奧美沙坦組中除正常飲食外，給予大鼠四周奧美沙坦處理。兩組大鼠再被隨機(jī)分配到以下三個(gè)亞組:偽手術(shù)(Sham)組、缺血再灌注(IR)組和遠(yuǎn)程中處理組(RIPER)。Sham組:縫合線穿過(guò)SHR的左冠狀動(dòng)脈前降支下方，但不阻斷血流;IR組:對(duì)大鼠的左冠狀動(dòng)脈前降支阻斷血流40分鐘后，給予180分鐘再灌注處理;RIPER組:左前降支阻斷血流后，使用止血帶阻斷大鼠的左后肢血流，做3

8、周期5分鐘缺血/5分鐘再灌注的遠(yuǎn)程中處理，余同IR組。
　　檢測(cè)各組大鼠左室肥厚指數(shù)(Left ventricular mass index，LVMI)、肌酸激酶(Creatine kinase，CK)、缺血和再灌注期間的心率變化、心律失常評(píng)分、梗死面積及病理變化、HIF-1α的mRNA表達(dá)、 miR-21的mRNA表達(dá)以及miR-210的mRNA表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　服用奧美沙坦四周后，大鼠血壓顯著降低，左室肥厚顯

9、著減輕。在服用賦形劑的大鼠中，Vehicle-IR組及Vehicle-RIPER組的CK值、梗死面積大小、缺血期間和再灌注期間的心律失常評(píng)分無(wú)顯著差異。RIPER的保護(hù)作用在SHR中消失。
　　在服用奧美沙坦的大鼠中，與Olmesartan-IR組相比，CK值、梗死面積及再灌注期間的心律失常評(píng)分在Olmesartan-RIPER組中顯著減少。奧美沙坦恢復(fù)了RIPER的保護(hù)作用。在服用奧美沙坦的大鼠中，與Olmesartan-IR組

10、相比，HIF-1α的表達(dá)，miR-21的表達(dá)和miR-210的表達(dá)在Olmesartan-RIPER組中顯著增加。
　　結(jié)論:
　　基于上述數(shù)據(jù)，本研究首次證實(shí):1、RIPER的心肌保護(hù)作用在SHR中消失;服用奧美沙坦后，RIPER的保護(hù)作用得到恢復(fù);2、RIPER保護(hù)作用的恢復(fù)與HIF-1α的上調(diào)和凋亡相關(guān)基因miR-21和miR-210的上調(diào)有關(guān)。
　　第三部分遠(yuǎn)程缺血后處理在自發(fā)性高血壓大鼠心肌缺血再灌注損傷中的

11、作用
　　目的:
　　遠(yuǎn)程缺血后處理(Remote ischemic postconditioning，RIPOST)是減輕缺血再灌注(Ischemia reperfusion，IR)損傷的新策略。然而遠(yuǎn)程缺血后處理在自發(fā)性高血壓大鼠(Spontaneously hypertensive rat，SHR)中是否有效仍不明確。本部分的主要研究目的在于:1、研究RIPOST在SHR中是否仍具有保護(hù)作用;2、研究服用奧美沙坦四周是

12、否影響RIPOST的保護(hù)作用;3、研究保護(hù)作用是否與HIF-1α，miR-21及miR-210有關(guān)
　　方法:
　　60只大鼠隨機(jī)分為兩個(gè)大組:賦形劑(Vehicle)組和奧美沙坦(Olmesartan)組。賦形劑組中除正常飲食外，給予大鼠四周賦形劑（蒸餾水）處理。奧美沙坦組中除正常飲食外，給予大鼠四周奧美沙坦處理。兩組大鼠再被隨機(jī)分配到以下三個(gè)亞組:偽手術(shù)(Sham)組、缺血再灌注(IR)組和遠(yuǎn)程后處理組(RIPOST)。

13、Sham組:縫合線穿過(guò)SHR的左冠狀動(dòng)脈前降支下方，但不阻斷血流;IR組:對(duì)大鼠的左冠狀動(dòng)脈前降支阻斷血流40分鐘后，給予180分鐘再灌注處理;RIPOST組:在復(fù)灌的同時(shí)，使用止血帶阻斷大鼠的左后肢血流，做3周期5分鐘缺血/5分鐘再灌注的遠(yuǎn)程后處理，余同IR組。
　　檢測(cè)各組大鼠左室肥厚指數(shù)(Left ventricular mass index，LVMI)、肌酸激酶(Creatine kinase，CK)、缺血和再灌注期間的心

14、率變化、心律失常評(píng)分、梗死面積及病理變化、HIF-1α的mRNA表達(dá)、 miR-21的mRNA表達(dá)以及miR-210的mRNA表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　服用奧美沙坦四周后，大鼠血壓顯著降低，左室肥厚顯著減輕。在服用賦形劑的大鼠中，Vehicle-IR組及Vehicle-RIPOST組的CK值、梗死面積大小、缺血期間和再灌注期間的心律失常評(píng)分無(wú)顯著差異。RIPOST的保護(hù)作用在SHR中消失。
　　在服用奧美沙坦的大鼠中，與

15、Olmesartan-IR組相比，CK值和梗死面積在Olmesartan-RIPOST組中顯著減少。在服用奧美沙坦的大鼠中，再灌注期間的心律失常評(píng)分在Olmesartan-RIPOST組與Olmesartan-IR組之間無(wú)顯著差異。在服用奧美沙坦的大鼠中，與Olmesartan-IR組相比，HIF-1α的表達(dá)，miR-21的表達(dá)和miR-210的表達(dá)在Olmesartan-RIPOST組中顯著增加。
　　結(jié)論:
　　基于上述

16、數(shù)據(jù)，本研究首次證實(shí):1、RIPOST的保護(hù)作用在SHR中消失;服用奧美沙坦后，RIPOST的保護(hù)作用得到恢復(fù);2、RIPOST保護(hù)作用的恢復(fù)與HIF-1α的上調(diào)和凋亡相關(guān)基因miR-21和miR-210的上調(diào)有關(guān)。
　　第四部分遠(yuǎn)程缺血中處理聯(lián)合遠(yuǎn)程缺血后處理在自發(fā)性高血壓大鼠心肌缺血再灌注損傷中的作用
　　目的:
　　遠(yuǎn)程缺血中處理(Remote ischemic perconditioning，RIPER)和遠(yuǎn)程

17、缺血后處理(Remote ischemic postconditioning，RIPOST)是減輕缺血再灌注(Ischemiareperfusion，IR)損傷的新策略。然而，遠(yuǎn)程缺血中處理和遠(yuǎn)程缺血后處理的聯(lián)合處理在自發(fā)性高血壓大鼠(Spontaneously hypertensive rat，SHR)中是否具有聯(lián)合保護(hù)作用仍不明確。本部分的主要研究目的在于:1、研究RIPER和RIPOST的聯(lián)合處理在SHR中是否仍具有保護(hù)作用;2、

18、研究與單獨(dú)使用RIPER和RIPOST相比，聯(lián)合處理是否具有疊加保護(hù)作用;3、研究服用奧美沙坦四周是否影響RIPER和RIPOST的聯(lián)合處理的保護(hù)作用。
　　方法:
　　100只自發(fā)性高血壓大鼠隨機(jī)分為兩個(gè)大組:賦形劑(Vehicle)組和奧美沙坦(Olmesartan)組。賦形劑組中除正常飲食外，給予大鼠四周賦形劑（蒸餾水）處理。奧美沙坦組中除正常飲食外，給予大鼠四周奧美沙坦處理。兩組大鼠再被隨機(jī)分配到以下五個(gè)亞組:偽手術(shù)

19、(Sham)組、缺血再灌注(IR)組、遠(yuǎn)程中處理(RIPER)組、遠(yuǎn)程后處理組(RIPOST)和聯(lián)合(RIPER+RIPOST)組。Sham組:縫合線穿過(guò)大鼠的左冠狀動(dòng)脈前降支下方，但不阻斷血流;IR組:對(duì)大鼠的左冠狀動(dòng)脈前降支阻斷血流40分鐘后，給予180分鐘再灌注處理;RIPER組:左前降支阻斷血流后，使用止血帶阻斷大鼠的左后肢血流，做3周期5分鐘缺血/5分鐘再灌注的遠(yuǎn)程中處理，余同IR組;RIPOST組:在復(fù)灌的同時(shí)，使用止血帶阻

20、斷大鼠的左后肢血流，做3周期5分鐘缺血/5分鐘再灌注的遠(yuǎn)程后處理，余同IR組;RIPER+RIPOST組:在左前降支阻斷血流后和復(fù)灌的同時(shí)，使用止血帶阻斷大鼠的左后肢血流，做3周期5分鐘缺血/5分鐘再灌注的聯(lián)合處理，余同IR組。
　　檢測(cè)各組大鼠左室肥厚指數(shù)(Left ventricular mass index，LVMI)、肌酸激酶(Creatine kinase，CK)、缺血和再灌注期間的心率變化、心律失常評(píng)分、梗死面積及病理

21、變化、HIF-1α的mRNA表達(dá)、 miR-21的mRNA表達(dá)以及miR-210的mRNA表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　服用奧美沙坦四周后，大鼠血壓顯著降低，左室肥厚顯著減輕。在服用賦形劑的大鼠中，Vehicle-IR組、Vehicle-RIPER組、Vehicle-IPOST組和Vehicle-RIPER+RIPOST組CK值、梗死面積大小、缺血期間和再灌注期間的心律失常評(píng)分無(wú)顯著差異。RIPER、RIPOST和RIPER+RI

22、POST的聯(lián)合處理在SHR中的保護(hù)作用消失。
　　在服用奧美沙坦的大鼠中，與Olmesartan-IR組相比，CK值和梗死面積在Olmesartan-RIPER組、Olmesartan-RIPOST組和Olmesartan-RIPER+RIPOST組中顯著減少，但CK值和梗死面積在Olmesartan-RIPER組、Olmesartan-RIPOST組和Olmesartan-RIPER+RIPOST組之間無(wú)顯著差異。在服用奧美沙坦

23、的大鼠中，與Olmesartan-IR組相比， HIF-1α的表達(dá)在Olmesartan-RIPER組、Olmesartan-RIPOST組和Olmesartan-RIPER+RIPOST組中顯著增加，但HIF-1α的表達(dá)在 Olmesartan-RIPER組、 Olmesartan-RIPOST組和Olmesartan-RIPER+RIPOST組之間無(wú)顯著差異。在服用奧美沙坦的大鼠中，聯(lián)合處理在減少梗死面積方面沒(méi)有疊加保護(hù)作用可能與聯(lián)

24、合處理不能使HIF-1α的表達(dá)進(jìn)一步增加有關(guān)。
　　在服用奧美沙坦的大鼠中，與Olmesartan-IR組相比，再灌注期間的心律失常評(píng)分在Olmesartan-RIPER組和Olmesartan-RIPER+RIPOST組中顯著減少;Olmesartan-RIPOST組與Olmesartan-IR組相比無(wú)顯著差異。心律失常評(píng)分在Olmesartan-RIPER組和Olmesartan-RIPER+RIPOST組之間無(wú)顯著差異。服用

25、奧美沙坦之后，聯(lián)合處理不能進(jìn)一步減少心律失常的發(fā)生，這與RIPOST不能降低再灌注期間心律失常有關(guān)。
　　在服用奧美沙坦的大鼠中，與Olmesartan-IR組相比，miR-21的表達(dá)和miR-210的表達(dá)在 Olmesartan-RIPER組、 Olmesartan-RIPOST組和Olmesartan-RIPER+RIPOST組中顯著增加;且與Olmesartan-RIPER組和Olmesartan-RIPOST組相比， mi

26、R-21的表達(dá)和miR-210的表達(dá)在Olmesartan-RIPER+RIPOST組中進(jìn)一步顯著增加，表明服用奧美沙坦之后，聯(lián)合處理在抑制凋亡方面具有疊加保護(hù)作用。
　　結(jié)論:
　　基于上述數(shù)據(jù)，本研究首次證實(shí):1、RIPER與RIPOST的聯(lián)合處理的保護(hù)作用在SHR中消失;服用奧美沙坦后，RIPER與RIPOST的聯(lián)合處理的保護(hù)作用得到恢復(fù);2、在服用奧美沙坦之后，與單獨(dú)使用RIPER、RIPOST相比，RIPER與RI