神經(jīng)嵴干細(xì)胞定向分化黑色素細(xì)胞前體的機(jī)理研究.pdf

1、目的:本課題旨在研究神經(jīng)嵴干細(xì)胞來(lái)源的黑色素細(xì)胞前體發(fā)育的分子機(jī)制,探討哪些因子在其發(fā)育過(guò)程中發(fā)揮作用。
　　 方法:利用免疫熒光檢測(cè)的方法,找出神經(jīng)嵴來(lái)源的黑色素細(xì)胞前體出現(xiàn)的時(shí)間；采用原代小鼠胚胎神經(jīng)管外植法技術(shù)對(duì)小鼠胚胎神經(jīng)管進(jìn)行體外培養(yǎng),通過(guò)移除神經(jīng)管和替換神經(jīng)管兩種辦法以檢測(cè)神經(jīng)管對(duì)黑色素細(xì)胞前體發(fā)育的影響；通過(guò)基因芯片的方法找出Mitf基因敲除型小鼠神經(jīng)管所分泌的多種生長(zhǎng)因子；并參考文獻(xiàn)資料后,通過(guò)體外培養(yǎng)小鼠胚胎神

2、經(jīng)管24h后移除神經(jīng)管,加入生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)分化黑色素細(xì)胞前體的辦法以檢測(cè)基因芯片中幾種可能的生長(zhǎng)因子在誘導(dǎo)神經(jīng)嵴干細(xì)胞定向分化成黑色素細(xì)胞前體過(guò)程中的作用,通過(guò)免疫熒光的方法對(duì)黑色素細(xì)胞前體進(jìn)行標(biāo)記,并計(jì)數(shù)比較,進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　 結(jié)果:B6野生型小鼠10.5天胚胎神經(jīng)管背側(cè)開(kāi)始有黑色素細(xì)胞前體出現(xiàn)；保留神經(jīng)管的神經(jīng)嵴干細(xì)胞中有較多黑色素細(xì)胞前體出現(xiàn),而移除神經(jīng)管后的神經(jīng)嵴干細(xì)胞中檢測(cè)不到MITF蛋白表達(dá)的細(xì)胞；當(dāng)Mitf基因

3、敲除型小鼠神經(jīng)管存在于B6野生型小鼠神經(jīng)嵴干細(xì)胞中,神經(jīng)嵴干細(xì)胞能夠分化成黑色素細(xì)胞前體；Kit1,EDN3,Wnt3a對(duì)于表達(dá)MITF蛋白的黑色素細(xì)胞前體的產(chǎn)生是必需的。
　　 結(jié)論:神經(jīng)嵴來(lái)源的黑色素細(xì)胞前體在小鼠10.5天胚胎神經(jīng)管背側(cè)開(kāi)始出現(xiàn)；神經(jīng)管在神經(jīng)嵴干細(xì)胞分化成黑色素細(xì)胞前體的發(fā)育過(guò)程中起著極其重要的作用,為神經(jīng)嵴干細(xì)胞定向分化成黑色素細(xì)胞前體所必需；Kit1,EDN3,Wnt3a三種生長(zhǎng)因子在神經(jīng)嵴來(lái)源的黑色素