Omi-HtrA2熒光蛋白表達(dá)載體的構(gòu)建及其在卵巢漿液性囊腺癌HO8910PM細(xì)胞株中的作用.pdf

1、遵義醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文OmiHtrA2熒光蛋白表達(dá)載體的構(gòu)建及其在卵巢漿液性囊腺癌HO8910PM細(xì)胞株中的作用姓名：宰國(guó)真申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師：鄭洪20070501遵義醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文Omi／ItUA2熒光蛋白表達(dá)載體的構(gòu)建及其在卵巢癌H08910PM細(xì)胞株中的作用0mi／HtrA2熒光蛋白表達(dá)載體的構(gòu)建及其在卵巢漿液性囊腺癌H08910Pg細(xì)胞株中的作用碩士研究生：宰國(guó)真導(dǎo)師：鄭洪教授中文摘要背景與目

2、的：細(xì)胞凋亡調(diào)節(jié)紊亂與腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)Omi／HtrA2是新近發(fā)現(xiàn)的一種促凋亡因子，可通過(guò)抑制凋亡抑制蛋白(1APs)、活化半胱氮酸天冬氨酸蛋白酶(Caslmt)途徑和絲氮酸蛋白酶途徑雙通路促進(jìn)細(xì)胞凋亡目前有關(guān)Omi／HtrA2在卵巢癌中的作用的研究尚未見報(bào)道本研究旨在探討Omi／HtrA2在卵巢漿液性囊腺癌中的表達(dá)，及其對(duì)人卵巢漿液性囊腺癌110891卯M細(xì)胞凋亡的影響材料與方法：研究對(duì)象為人正常卵巢組織和H08910PM細(xì)胞株(高

3、轉(zhuǎn)移性人卵巢漿液性囊腺癌)(1)采用逆轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈反應(yīng)(RTPCR)法檢鍘Omi／HtrA2mRNA在卵巢漿液性囊腺癌HO眇loPM細(xì)胞株和正常卵巢組織中的表達(dá)(2)采用基因克隆技術(shù)構(gòu)建pDsRed2Omi／HtrA2融合基因；以脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染pDsRed2Omi／HtrA2融合基因至H08910PM細(xì)胞株中，熒光顯微鏡下觀察其蛋白在H08910PM中的表達(dá)和定位；并采用流式細(xì)胞術(shù)及nJNEL方法檢測(cè)Omi／HtrA2對(duì)H08910PM

4、細(xì)胞凋亡的作用結(jié)果：(1)砌諍CI濕示在人正常卵巢組織中Omi／lhrA2mRNA有微弱表達(dá)，而在人高轉(zhuǎn)移性卵巢漿液性囊腺癌H08910PM細(xì)胞中卻末檢測(cè)到Omi／HtrA2mRNA的表達(dá)(2)采用基因克隆技術(shù)構(gòu)建的pDsRed2Omi／HuA2融合基因。通過(guò)PCR技術(shù)和酶切反應(yīng)證實(shí)其插入片斷與預(yù)知的相符。其融合蛋白藿EI108910PM細(xì)胞中的定位主要表現(xiàn)為彌敢性分布于細(xì)胞漿或細(xì)胞核，且蛋白表達(dá)量在一定范圍內(nèi)隨轉(zhuǎn)染濃度的增加而增加在轉(zhuǎn)