E-cadherin基因在HO-8910和HO-8910PM中的表達(dá)及其機(jī)制的探討.pdf

1、目的：惡性腫瘤是當(dāng)今世界上嚴(yán)重危害人類(lèi)健康的重大疾病之一。腫瘤轉(zhuǎn)移所導(dǎo)致的多臟器功能衰竭是患者死亡的主要原因。目前，臨床上防止腫瘤轉(zhuǎn)移是治療腫瘤的關(guān)鍵之一。隨著對(duì)腫瘤分子生物學(xué)的深入研究，人們發(fā)現(xiàn)腫瘤轉(zhuǎn)移是一個(gè)多因素、多步驟并且涉及細(xì)胞間相互作用的復(fù)雜的病理生理過(guò)程，它包括癌細(xì)胞在原發(fā)灶增殖、脫落、侵入轉(zhuǎn)移點(diǎn)并增殖。轉(zhuǎn)移的形成除具備基因組異常導(dǎo)致相應(yīng)的惡性表型，尚需其他多種因素協(xié)同作用，黏附分子是其中的一個(gè)重要因素。黏附分子中的E-鈣粘

2、附蛋白是細(xì)胞粘附家族中重要的組成部分，是一類(lèi)位于上皮細(xì)胞內(nèi)介導(dǎo)同型細(xì)胞間粘附、調(diào)控細(xì)胞極性、維持細(xì)胞完整性的鈣依賴(lài)性的跨膜糖蛋白，E-鈣粘附蛋白表達(dá)下調(diào)或缺失可導(dǎo)致細(xì)胞粘附功能下降，促使腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移。在許多腫瘤中都發(fā)現(xiàn)E-鈣粘附蛋白表達(dá)的異常。 卵巢癌是女性生殖器三大惡性腫瘤之一，卵巢癌具有癌細(xì)胞從癌體脫落，進(jìn)入腹水，繼而在腹膜、網(wǎng)膜、腸漿膜表面廣泛種植等特點(diǎn)，研究發(fā)現(xiàn)癌細(xì)胞的黏附、轉(zhuǎn)移與E-鈣粘附蛋白之間的關(guān)系較為密切。HO-

3、8910是浙江省腫瘤研究所以分化差的卵巢乳頭狀漿液性囊腺癌患者腹水為材料，建立的體外培養(yǎng)的人卵巢漿液性囊腺癌細(xì)胞系，在高轉(zhuǎn)移人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型的基礎(chǔ)上，取該模型移植瘤組織在體外貼壁培養(yǎng)，又建立成了高轉(zhuǎn)移人卵巢癌體外細(xì)胞HO-8910PM，研究證實(shí)HO-8910PM是一株較母系更具侵襲和轉(zhuǎn)移生長(zhǎng)潛能的細(xì)胞株，是研究腫瘤轉(zhuǎn)移機(jī)制較為理想的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?。我們利用這兩個(gè)細(xì)胞株作為對(duì)象研究E-鈣粘附蛋白在這兩種腫瘤細(xì)胞中表達(dá)的差異及出現(xiàn)該差異

4、的分子機(jī)制，來(lái)探討腫瘤的轉(zhuǎn)移機(jī)制。 方法：1.通過(guò)免疫細(xì)胞化學(xué)方法以及WesternBlotting方法來(lái)檢測(cè)E-鈣粘附蛋白在HO-8910和HO-8910PM細(xì)胞系中的定位及表達(dá)情況：①對(duì)兩株細(xì)胞中的E-鈣粘附蛋白用免疫細(xì)胞化學(xué)方法(SP法)進(jìn)行定位，Image-ProPlus4.5圖像分析軟件處理顯微鏡圖像，并用SPSS¨.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。②通過(guò)WesternBlotting方法(DAB法)檢測(cè)E-鈣粘附蛋白在HO-891

5、0和HO-8910PM細(xì)胞系中表達(dá)的差異。2.分析E-鈣粘附蛋白在HO-8910和HO-8910PM細(xì)胞系中表達(dá)出現(xiàn)差異的原因：采用PCR方法擴(kuò)增HO-8910和HO-8910PM細(xì)胞系中E-cadherin的6～9外顯子，毛細(xì)管電泳-激光誘導(dǎo)熒光技術(shù)檢測(cè)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物是否發(fā)生突變。 結(jié)果：1.免疫細(xì)胞化學(xué)方法分析顯示E-cad定位于胞漿中，HO-8910細(xì)胞的胞漿中有大量棕黃色/棕褐色顆粒；而HO-8910PM細(xì)胞的胞漿中有少

6、量淡黃色顆?；驘o(wú)顆粒出現(xiàn)。統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果分析顯示：E-cad在HO-8910和HO-8910PM細(xì)胞中的單個(gè)細(xì)胞平均光密度±標(biāo)準(zhǔn)差分別為225.63±87.75和23.16±16.86，P值為0.01(兩樣本t檢驗(yàn))，兩者具有顯著性差異，即E-cad在HO-8910細(xì)胞中呈陽(yáng)性表達(dá)，而在HO-8910PM細(xì)胞中的表達(dá)明顯減弱或無(wú)表達(dá)。2.Westernblotting檢測(cè)E-鈣粘附蛋白在HO-8910中表達(dá)，而在HO-8910PM中不表達(dá)。

7、3.PCR法均擴(kuò)增出HO-8910和HO-8910PM細(xì)胞系中E-cadheirn的6～9外顯子，毛細(xì)管電泳-激光誘導(dǎo)熒光技術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示：HO-8910PM細(xì)胞系中E-cadherin基因的外顯子9發(fā)生突變。 結(jié)論：1.E-鈣粘附蛋白在正常的卵巢表面上皮中不表達(dá)，在體外培養(yǎng)的HO-8910中陽(yáng)性表達(dá)，主要定位于細(xì)胞漿中，在HO-8910PM中表達(dá)明顯降低甚至無(wú)表達(dá)，表明E-鈣粘附蛋白的出現(xiàn)及表達(dá)與腫瘤的高低轉(zhuǎn)移性有著密切的關(guān)系