大鼠動脈粥樣硬化并發(fā)骨質疏松模型的建立及功能紅曲制劑防治作用的研究.pdf

1、[目的]
　　 采用高脂飼養(yǎng)及大劑量維生素D3損傷血管建立大鼠動脈粥樣硬化并發(fā)骨質疏松模型，通過觀察大鼠動脈的血脂變化，血管病理變化、骨形態(tài)學變化、骨無機物和有機物含量檢測、骨生物力學檢測及骨密度檢測等手段，觀察動脈粥樣硬化并發(fā)骨質疏松的模型特點，探討其發(fā)生機制。研究同時，還通過該動物模型，觀察功能紅曲制劑對動脈硬化與骨質疏松的防治作用，與血脂康和淫羊藿進行對照比較，探討藥物的干擾作用并探討大鼠抗動脈粥樣硬化并發(fā)骨質疏松的作用機

2、制。
　　 [方法]
　　 1長期高脂+大劑量維生素D3致大鼠動脈粥樣硬化并發(fā)骨質疏松實驗模型的探討選取3月齡SPF級雄性SD大鼠20只，體重(252.8±16.7)g，隨機分為2組，對照組(Cont，10只)：實驗開始時蒸餾水5ml·kg-1·d-1灌胃；模型組(V.H，10只)：實驗開始時以高脂乳劑(5％膽固醇、1％膽酸鈉、0.5％丙基硫氧嘧啶)5ml·kg-1·d-1灌胃，連續(xù)38d，停用高脂乳劑，用常規(guī)飼料飼養(yǎng)2

3、w后，再用維生素D3(1×106U·kg-1·d-1)連續(xù)灌胃3d，5d后，再用高脂乳劑灌胃，連續(xù)28d。各組大鼠飼養(yǎng)條件相同，平均每6d記錄一次體重情況，實驗為期88d(含觀察期)。
　　 所有動物實驗結束前第14d、13d各行頸部皮下注射鹽酸四環(huán)素(37.5mg/kg)，作為第1次熒光標記，在實驗結束前第4d、3d各行頸部皮下注射鈣黃綠素(10mg/kg)作為第2次熒光標記，以在骨表面形成綠色雙熒光標志，兩次熒光標記間隔時間

4、為10d。實驗第29d，第39d經(jīng)大鼠眼眶靜脈叢取血動態(tài)監(jiān)測血脂水平，實驗結束時，大鼠心臟取血處死，分離血清作生化指標(總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇、鈣、磷)測定；取胸主動脈，石蠟包埋，連續(xù)切片，HE染色進行形態(tài)學分析；分離右脛骨進行骨組織形態(tài)計量學測定；分離右股骨作骨密度測定、骨成份(骨鈣、磷、以及羥脯氨酸)測定、生物力學三點彎曲試驗。
　　 2功能紅曲制劑對動脈粥樣硬化與骨質疏松防治作用的研究選

5、取3月齡SPF級雄性SD大鼠62只，體重(251.8±18.3)g，隨機分為7組，基礎對照組(BAS，6只)實驗0天；對照組(Cont，10只)：實驗開始時蒸餾水5ml·kg-1·d-1灌胃；模型組(V.H，10只)、模型+血脂康組(V.H+XZK，9只)、模型+功能紅曲制劑組(V.H+RK，9只)、模型+淫羊藿組(V.H+Epi.，9只)、模型+功能紅曲制劑+淫羊藿組(V.H+R.E，9只)，從實驗開始時以高脂乳劑(5％膽固醇、1％膽

6、酸鈉、0.5％丙基硫氧嘧啶)5ml·kg-1·d-1灌胃，連續(xù)38d。停用高脂乳劑，用常規(guī)飼料飼養(yǎng)2w后，再用維生素D3(1×106U·kg-1·d-1)連續(xù)灌胃3d，觀察5d后，再用高脂乳劑灌胃，連續(xù)28d在灌胃高脂乳劑后間隔3h以上再分別給予蒸餾水(5ml·kg-1·d-1)、血脂康顆?；鞈乙?107mg·kg-1·d-1)、紅曲制劑混懸液(5ml·kg-1·d-1)、淫羊藿混懸液(5g·kg-1·d-1)、功能紅曲制劑+淫羊藿混懸

7、液(5ml·kg-1·d-1)。各組大鼠飼養(yǎng)條件相同，平均每6d記錄一次體重情況，實驗為期88d(含觀察期)。
　　 所有動物實驗結束前第14d、13d各行頸部皮下注射鹽酸四環(huán)素(37.5mg/kg)，作為第1次熒光標記，在實驗結束前第4d、3d各行頸部皮下注射鈣黃綠素(10mg/kg)作為第2次熒光標記，以在骨表面形成黃色、綠色雙熒光標志，兩次熒光標記間隔時間為10d。實驗結束時，大鼠心臟取血處死，分離血清作生化指標(總膽固醇

8、、甘油三酯、低密度脂蛋白膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇、鈣、磷)測定；取胸主動脈，石蠟包埋，連續(xù)切片，HE染色、von Kossa染色進行形態(tài)學分析；分離右脛骨進行骨組織形態(tài)計量學測定；分離右股骨作骨密度測定、骨成份(骨鈣、磷、以及羥脯氨酸)測定、生物力學三點彎曲試驗。
　　 [結果]
　　 1.長期高脂+大劑量維生素D3(V.H)可致雄性大鼠產(chǎn)生動脈粥樣硬化并發(fā)骨質疏松(1)高脂喂食可使模型組大鼠體重增幅加大，并明顯超過對

9、照組(Cont)(P<0.01)，在連續(xù)3d給予超生理劑量的維生素D3注射液灌胃后，大鼠體重急劇下降，并表現(xiàn)為食欲不振，精神萎靡等狀態(tài)，此時對照組(Cont)組體重高于模型組(V.H)組大鼠(P<0.01)，繼續(xù)給予高脂喂食后，大鼠體重開始回升并重新超過對照組(Cont)組，但無統(tǒng)計學意義。
　　 (2)與對照組(Cont)相比，實驗過程中動態(tài)監(jiān)測血清生化指標發(fā)現(xiàn)，模型組(V.H)在實驗第29d，V.H組TC上升(P<0.01)

10、；實驗第39d，V.H組TC、LDL-c均上升(P<0.01)，H/T、H/L均降低(P<0.01)；實驗結束時，V.H組TC、LDL-c升高(P<0.01)，H/T、H/L降低(P<0.01)，鈣含量升高(P<0.01)。
　　 (3)與對照組(Cont)相比，模型組(V.H)胸主動脈管壁管腔明顯呈不規(guī)則狀且增大，內(nèi)皮的完整性遭破壞，中膜明顯萎縮，彈性纖維層結構不清，排列疏松，延展性降低，內(nèi)外壁輪廓凹凸不平或殘缺不整，粥樣硬化

11、斑塊內(nèi)鈣化明顯。
　　 (4)與對照組(Cont)相比，模型組(V.H)組大鼠的骨組織變化表現(xiàn)有，大鼠脛骨上段松質骨骨小梁間隔增寬，分布松散。分布面積減小(P<0.01)，骨小梁數(shù)目減少(P<0.01)，骨形成率(BFR/TV、BFR/BS)下降(P<0.01)。股骨骨礦鹽含量下降(P<0.01)，股骨全骨密度下降(P<0.01)，生物力學參數(shù)：最大載荷及斷裂載荷均顯著下降(P<0.05)。
　　 2功能紅曲制劑和血脂康

12、對動脈粥樣硬化防治作用的研究(1)功能紅曲制劑對動脈粥樣硬化的防治作用①血脂檢測顯示，與模型組(V.H)相比，功能紅曲制劑使血清TC、TG、LDL-c明顯降低(P<0.01)，而對HDL-c有明顯升高作用(P<0.01)，H/T、H/L也升高(P<0.01)，同時還可顯著降低血清Ca、P含量(P<0.01)。
　　 ②大鼠動脈形態(tài)學顯示，與模型組(V.H)相比，功能紅曲制劑組(V.H+RK)內(nèi)、中、外膜結構尚算完整，無大片的鈣化

13、斑塊沉積，但彈力纖維疏松，延展性降低，部分斷裂。
　　 (2)血脂康對動脈粥樣硬化的防治作用①血脂檢測顯示，與模型組(V.H)相比，血脂康使血清TC、LDL-c明顯降低(P<0.01)，對HDL-c升高作用不明顯，但H/T、H/L顯著升高(P<0.01)，同時還可顯著降低血清P含量(P<0.01)，對血清鈣含量影響不大。
　　 ②大鼠動脈形態(tài)學顯示，與模型組(V.H)相比，血脂康(V.H+XZK)內(nèi)、外膜結構尚算完整，中

14、膜層次分明，但彈力纖維疏松，結構清晰，延展性降低，無大片的鈣化斑塊沉積，但彈力纖維疏松，延展性降低。
　　 (3)紅曲與血脂康對動脈粥樣硬化的防治作用比較①血脂檢測顯示，與血脂康組(V.H+XZK)相比，功能紅曲制劑使血清LDL-c明顯降低(P<0.01)，對HDL-c、H/T值有明顯升高作用(P<0.05)。
　　 ②大鼠動脈形態(tài)學顯示，與血脂康組(V.H+XZK)相比，功能紅曲制劑組(V.H+RK)中膜結構更加完整，

15、鈣化斑較小。
　　 3功能紅曲制劑和淫羊藿對骨質疏松防治作用的研究(1)功能紅曲制劑對骨質疏松的防治作用功能紅曲制劑組(V.H+RK)與模型組相比，骨小梁分布面積增大(P<0.01)，骨小梁面積百分數(shù)、骨小梁厚度、熒光周長百分數(shù)均明顯增加(P<0.01)，骨形成率BFR/TV、BFR/BS均升高(P<0.05)。骨鈣含量變化不大。功能紅曲制劑使最大撓度降低(P<0.05)、最大載荷、斷裂載荷、剛度系數(shù)明顯增高(P<0.05)。<

16、br>　　 (2)淫羊藿對骨質疏松的防治作用淫羊藿(V.H+Epi.)組與模型組相比，骨小梁結構連續(xù)而細密，骨小梁面積百分數(shù)、骨小梁數(shù)目、熒光周長百分數(shù)均顯著增加(P<0.01)，而骨小梁分離度明顯降低(P<0.01)，骨礦化沉積率、骨形成率(BFR/TV、BFR/BV、BFR/BS)也明顯升高(P<0.05)。淫羊藿還可以使彈性載荷、彈性模量升高(P<0.05)，最大撓度降低(P<0.05)，增加骨鈣含量(P<0.05)，提高腰椎骨

17、密度(P<0.01)。
　　 (3)功能紅曲制劑+淫羊藿混懸液對骨質疏松的防治作用功能紅曲制劑+淫羊藿混懸液(V.H+R.E)組與模型組相比，骨小梁結構比較連續(xù)而粗密，骨小梁面積百分數(shù)、骨小梁厚度、均升高(P<0.01)，骨小梁分離度降低(P<0.05)，熒光周長百分數(shù)、骨礦化沉積率、骨形成率(BFR/TV)增加(P<0.05)。紅曲制劑+淫羊藿混懸液可以降低最大撓度、斷裂撓度(P<0.05)，提高骨鈣、骨鎂以及骨羥脯氨酸含量(

18、P<0.05)。
　　 (4)功能紅曲制劑與淫羊藿對骨質疏松的防治作用比較功能紅曲制劑組與淫羊藿(V.H+Epi.)組相比，功能紅曲制劑組骨小梁面積百分數(shù)、骨小梁數(shù)目、腰椎骨密度均降低(P<0.05)，骨小梁分離度升高(P<0.05)。
　　 [結論]
　　 1.長期高脂飲食加上大劑量維生素D3(V.H)造成血管壁損傷，可導致大鼠血脂代謝異常、動脈粥樣硬化，并可引起骨質疏松。
　　 2.功能紅曲制劑能有效