慢病毒介導(dǎo)的靶向CTHRC1小干擾RNA對(duì)人黑素瘤細(xì)胞A375凋亡、增殖及遷移的影響.pdf

1、目的：利用siRNA抑制黑素瘤細(xì)胞膠原三螺旋重復(fù)蛋白1（collagen triple helix repeat containing1,CTHRC1）基因的表達(dá)，探討其對(duì)人黑素瘤細(xì)胞A375凋亡、增殖及遷移的影響及作用機(jī)制。
　　方法：構(gòu)建siRNA慢病毒載體GV118-CTHRC1-RNAi轉(zhuǎn)染至A375細(xì)胞中，實(shí)驗(yàn)分4組：空載體組（CON）、對(duì)照組(NC)、轉(zhuǎn)染組1（KD1）及轉(zhuǎn)染組2（KD2）。RT-PCR檢測(cè)CTHRC1

2、基因mRNA的表達(dá)情況，評(píng)估轉(zhuǎn)染后CTHRC1基因mRNA的表達(dá)水平變化，選取KD1組進(jìn)入后續(xù)實(shí)驗(yàn)；采用Annexin V-APC單染法流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率；利用CCK8試劑盒檢測(cè)細(xì)胞增殖活性變化；Transwell小室檢測(cè)細(xì)胞遷移能力；采用RT-PCR檢測(cè)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)因子（E-cad和N-cad）及細(xì)胞外基質(zhì)降解相關(guān)因子（MMP-1、MMP-2、MMP-9及MMP-13）的在mRNA水平的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：成功構(gòu)建C

3、THRC1基因的慢病毒siRNA載體，感染黑素瘤細(xì)胞明顯抑制CTHRC1的表達(dá)，敲減效率達(dá)到80％以上。NC組及KD1組在流式細(xì)胞儀檢測(cè)凋亡率分別為：2.13±0.27及8.17±0.14（P＜0.05)；與第1天相比，在第4、5天細(xì)胞增殖倍數(shù)分別是(5.295±0.300，5.370±0.275)及(5.943±0.158，5.540±0.454)（P值均＜0.05)；遷移實(shí)驗(yàn)中轉(zhuǎn)移率分別為0.981±0.317及0.912±0.20