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文檔簡介
1、目的:
1.以牛血清白蛋白(BSA)為模型蛋白,乳酸/羥乙酸共聚物(PLGA)為載體,通過優(yōu)化空白微球的制備工藝,為制備神經(jīng)生長因子緩釋微球奠定基礎(chǔ);
2.探索通過改良的復(fù)乳溶劑揮發(fā)法制備神經(jīng)生長因子緩釋微球,并考察其一般性質(zhì)和體外釋藥特征,從而為以后靶向治療脊髓損傷的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床研究打下了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。
方法:
1.采用復(fù)乳溶劑揮發(fā)法制備BSA-PLGA微球,通過激光粒度分析儀以
2、及掃描電鏡考察其表觀形態(tài)及粒徑,采用BCA(二喹林甲酸)微量蛋白測定法測定微球的蛋白含量并計(jì)算包封率和載藥量,恒溫?fù)u床緩釋法進(jìn)行體外釋放,測定微球24h釋放率,以包封率、載藥量、粒徑及24h釋放率等為觀察指標(biāo),通過正交設(shè)計(jì)法優(yōu)化顯著影響微球制備工藝條件的BSA用量、PEG用量、PLGA用量、PVA濃度、NaCl濃度、超聲功率以及復(fù)乳攪拌速度等7種因素。
2.以乳酸/羥乙酸共聚物(PLGA)為載體材料,分別采用全循環(huán)一體機(jī)裝
3、置(TROMS)和傳統(tǒng)復(fù)乳法制備神經(jīng)生長因子緩釋微球。通過激光粒度分析儀以及掃描電鏡考察其表觀形態(tài)及粒徑,采用ELISA法測定微球中神經(jīng)生長因子含量并計(jì)算其包封率,以微球形態(tài)、粒徑、包封率等為評(píng)價(jià)指標(biāo),并通過ELISA法和PC12細(xì)胞活性測定法考察其體外釋藥性質(zhì)。
結(jié)果:
1.通過正交設(shè)計(jì)優(yōu)化后的BSA-PLGA微球制備工藝條件是BSA用量為5mg、PEG用量為0.2mL、PLGA用量為200mg、PVA濃度
4、為1%、NaCl濃度為10%、超聲功率為40W、復(fù)乳攪拌速度為1000r/min。在此條件下制備的微球具有光滑的表面且形態(tài)規(guī)整均勻,近似圓形,無粘連,大部分微球的粒徑集中在(20.03±4.38)μm,突釋最少,包封率較高。
2.通過改良復(fù)乳法和傳統(tǒng)復(fù)乳法制備的微球粒徑分別為(22.61±3.94)μm和(21.32±4.82)μm,包封率分別為(92.08±4.39)%和(89.17±3.74)%。改良組的神經(jīng)生長因子微
5、球可以持續(xù)分泌有生物活性的神經(jīng)生長因子長達(dá)7周,累積釋放率為85.7%,而傳統(tǒng)組的微球只能釋放4周,累積釋放率為60.8%,且第4周時(shí)釋放的神經(jīng)生長因子活性明顯低于改良組,差異有顯著性意義(P<0.01)。
結(jié)論:
1.通過優(yōu)化后的制備工藝條件簡單、穩(wěn)定,在此條件下可以制得包封率較高、突釋較小、粒徑適宜的BSA-PLGA微球,且經(jīng)過重復(fù)性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證后,證明該批微球具有形態(tài)良好,粒徑分布均勻,可重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn),從
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