生長因子緩釋微球修復(fù)壓力性尿失禁鼠功能及結(jié)構(gòu)的研究.pdf

1、背景:
　　胰島素樣生長因子-1可用于治療經(jīng)陰道分娩的壓力性尿失禁病人損傷的尿道外括約肌。新的藥物控制釋放系統(tǒng)—海藻酸鈣-多聚鳥氨酸-明膠微球可用于包裹并保持生長因子的活性，實(shí)現(xiàn)活性藥物緩慢釋放，持續(xù)發(fā)揮治療作用。
　　目的:
　　1.制備IGF-1緩釋微球并檢測其理化性質(zhì)，分析微球的緩釋效果;
　　2.構(gòu)建產(chǎn)傷動(dòng)物模型，通過功能學(xué)試驗(yàn)以及組織學(xué)檢測驗(yàn)證IGF-1緩釋微球?qū)ζ淠蚩毓δ芗敖Y(jié)構(gòu)的恢復(fù)作用。
　　

2、方法:
　　1.通過乳化交聯(lián)法制備可緩釋IGF-1的海藻酸鈣-多聚鳥氨酸-明膠微球。在光鏡下觀察微球的形態(tài)并進(jìn)行粒徑分析，對(duì)微球的常溫體外孵育的穩(wěn)定性、體外機(jī)械強(qiáng)度、生物安全性進(jìn)行檢測分析，后通過ELISA試劑盒計(jì)算微球中IGF-1的包封率、載藥率及釋放特性。
　　2.使用陰道擴(kuò)張來模擬產(chǎn)傷模型。將動(dòng)物分為四個(gè)組，分別是假手術(shù)組、生理鹽水組、空載微球組和IGF-1微球組，按分組進(jìn)行處理。手術(shù)一周后進(jìn)行漏尿點(diǎn)壓試驗(yàn)和尿道外括約

3、肌肌電圖監(jiān)測。功能檢測后處死，取出尿道組織，處理后切片進(jìn)行染色，觀察尿道及周圍組織顯微形態(tài)結(jié)構(gòu)改變。
　　結(jié)果:
　　1.微球的制備、理化性質(zhì)及緩釋效果:
　　經(jīng)乳化交聯(lián)法可得到大小均一且穩(wěn)定的微球，平均直徑為（91.72±3.51）μm;微球體外孵育實(shí)驗(yàn)證明微球在等滲透壓生理鹽水中形態(tài)穩(wěn)定，并無膨脹或破裂;微球體外機(jī)械強(qiáng)度測試中，震蕩搖晃60小時(shí)后，微球的完整率仍為98.4±0.3％，表現(xiàn)出良好的穩(wěn)定性;三個(gè)不同濃度

4、(100％、50％、20％)的微球浸出液通過相對(duì)增值率RGR計(jì)算其細(xì)胞毒性分級(jí)均為0到1級(jí)，證明微球沒有細(xì)胞生物毒性;微球釋放IGF-1有“突釋”的特點(diǎn)，累計(jì)36小時(shí)微球中約90％的IGF-1生長因子被釋放，其后12天內(nèi)的釋放曲線呈現(xiàn)緩慢微量的線性增加趨勢;緩釋微球包裹IGF-1的載藥量為:606.52ng/g，包封率為45.3％。
　　2.IGF-1緩釋微球注射治療女性壓力性尿失禁模型鼠的作用及機(jī)制探討:
　　手術(shù)一周后對(duì)

5、SD鼠進(jìn)行漏尿點(diǎn)壓試驗(yàn)，假手術(shù)組的漏尿點(diǎn)壓為44.4±3.4cmH2O，而生理鹽水組與空載微球組的漏尿點(diǎn)壓分別為23.9±1.3 cmH2O和21.7±0.8 cmH2O，與假手術(shù)組相比顯著降低(p＜0.05)，而IGF-1微球組的漏尿點(diǎn)壓為28.4±1.2 cmH2O，比空載微球組有顯著性地提高(p＜0.05); Masson'sTrichrome染色可發(fā)現(xiàn)陰道擴(kuò)張損傷后的尿道外括約肌有廣泛的斷裂，肌肉排列紊亂，組織間有膠原纖維沉積，

6、經(jīng)過了IGF-1微球治療后可觀察到肌肉的層數(shù)比生理鹽水組和空載微球組有明顯的恢復(fù)，而且膠原纖維的沉積也更少，尿道外括約肌的形態(tài)結(jié)構(gòu)也完整;對(duì)于假手術(shù)組，CD31陽性的毛細(xì)血管密度在生理鹽水組和空載微球組明顯下降，而經(jīng)過IGF-1微球治療的大鼠的尿道組織具有更高密度的毛細(xì)血管密度，與生理鹽水組和空載微球組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　使用乳化交聯(lián)法可構(gòu)建大小均一、形態(tài)穩(wěn)定、有相當(dāng)機(jī)械強(qiáng)度和無生物毒性的海藻