己烯雌酚對小鼠睪丸引帶組織中AR、ERα、Acta1和PCNA mRNA表達(dá)的影響.pdf

1、目的：流行病學(xué)發(fā)現(xiàn)，近半個世紀(jì)以來，人類隱睪等雄性生殖系統(tǒng)畸形的發(fā)生率日趨增加，且與胎兒期母體內(nèi)分泌干擾物(Eds)暴露有關(guān)。但其確切作用機(jī)制依然很不清楚。新近研究發(fā)現(xiàn)，雄性生殖系統(tǒng)中普遍存在雌激素受體（ER）的表達(dá)，Eds可能直接通過ER對雄性生殖器官產(chǎn)生不利影響,但也有研究顯示Erα基因敲除小鼠睪丸大多不能正常下降，提示一定劑量雌激素可能是睪丸引帶正常發(fā)育所必須的。本研究采用公認(rèn)的代表性Eds己烯雌酚（DES）作用于孕期母鼠，檢測不

2、同劑量暴露對新生小鼠睪丸引帶雄激素受體（AR）、雌激素受體α（Erα）、增殖細(xì)胞核抗原（PCNA）和肌動蛋白α1（Acta1)mRNA表達(dá)的影響,以探討不同劑量Eds對睪丸引帶的發(fā)育和功能的影響及其可能的作用機(jī)理。
　　 方法：SPF級8~10周齡雌性昆明小鼠140 只，隨機(jī)分為7 組，每組20 只，組別為：正常組、對照組、實驗組1 、實驗組2 、實驗組3 、實驗組4 、實驗組5 。實驗組1、2、3、4、5分別給予DES0.02

3、 μg/kg ·d 、DES 0.1 μg/kg ·d 、DES 0.5 μg/kg ·d 、DES 10 μg/kg ·d，DES 50μg/kg ·d，DES以二甲基亞砜（DMSO）為溶劑；對照組僅給予DMSO；正常組不給任何藥物。每天下午6 時，按雌雄比例2:1 合籠，次日早晨8時檢查雌鼠有無出現(xiàn)陰栓（vaginal plug），以出現(xiàn)陰栓作為受孕標(biāo)志，發(fā)現(xiàn)陰栓當(dāng)天定為妊娠第0 天，記為GD0（gestation day，GD）。

4、雌鼠受孕后即單獨(dú)飼養(yǎng)于一鼠籠中。GD9 至GD17 上午8時皮下注射給藥，每次每只小鼠所用的DES 均溶于0.2ml DMSO后溶于NS中。仔鼠出生后第一天，每窩雄性仔鼠＜5 只者予淘汰，保留仔鼠中每劑量組隨機(jī)挑選6窩，每窩隨機(jī)挑選5 只雄性仔鼠，脫頸椎處死仔鼠，顯微解剖收獲得睪丸引帶。用Trizol法提取總RNA,瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度法鑒定RNA 完整性及純度。Dnase處理RNA樣本，然后行逆轉(zhuǎn)錄法合成第一鏈cDNA 。行普

5、通PCR 法鑒定睪丸引帶中存在AR 、Erα 、PCNA和Acta1基因mRNA 表達(dá)，運(yùn)用TaqMan探針技術(shù)行實時熒光定量PCR，檢測不同劑量DES染毒后AR 、Erα 、PCNA和Acta1 mRNA表達(dá)量的變化。
　　 結(jié)果：⑴正常新生昆明小鼠睪丸引帶中存在Erα 、AR 、PCNA及Acta1 mRNA的表達(dá)。⑵胚胎期不同劑量DES染毒對新生小鼠睪丸引帶ERαmRNA表達(dá)的影響不同。低劑量組(0.02 、0.1 μg/

6、kg ·d）中ERαmRNA 表達(dá)量快速上升（P<0.01），DES 到達(dá)0.5 μg/kg ·d后ERαmRNA 表達(dá)量上升不明顯，在高劑量組中出現(xiàn)一定的減少（P<0.05）。⑶胚胎期不同劑量DES染毒對新生小鼠睪丸引帶AR mRNA 的表達(dá)存在抑制作用，低劑量組(0.02 、0.1 μg/kg ·d）中AR mRNA 表達(dá)量輕微下降（P<0.05），DES 到達(dá)0.5 μg/kg.d后AR mRNA 表達(dá)量快速下降（P<0.01）。

7、⑷胚胎期不同劑量DES染毒對新生小鼠睪丸引帶Acta1 mRNA表達(dá)的影響不同。在低劑量組(0.1 μg/kg ·d）中Acta1 mRNA 表達(dá)量輕微上升（P<0.05），DES到達(dá)0.5 μg/kg ·d后Acta1 mRNA 表達(dá)量快速下降（P <0.01）。⑸胚胎期不同劑量DES染毒對新生小鼠睪丸引帶PCNA mRNA 表達(dá)的影響不同。在低劑量組(0.1 μg/kg ·d）中PCNA mRNA 表達(dá)量輕微上升（P<0.05）；D

8、ES到達(dá)0.5 μg/kg ·d后AR mRNA表達(dá)量快速下降（P <0.01）。⑹經(jīng)相關(guān)性分析，不同劑量DES影響下AR、PCNA及Acta1 mRNA 表達(dá)的改變有高度相關(guān)性（P<0.01）,且為正相關(guān)；ERαmRNA 表達(dá)與AR 、PCNA及Acta1 mRNA表達(dá)不存在統(tǒng)計學(xué)相關(guān)性。
　　 結(jié)論：①正常新生昆明小鼠睪丸引帶中存在Erα、AR、PCNA及Acta1mRNA的表達(dá)。②胚胎期不同劑量DES 染毒對小鼠睪丸引帶中

9、Erα、AR、PCNA及Acta1mRNA表達(dá)的影響不同。適當(dāng)劑量雌激素對睪丸引帶發(fā)育及功能可能是有益的，也有可能是一種代償反應(yīng)，有必要進(jìn)一步研究不同劑量下相應(yīng)蛋白的表達(dá)情況。高劑量DES對睪丸引帶存在毒性抑制作用，明顯抑制AR 、PCNA及Acta1 mRNA表達(dá)。③不同劑量DES影響下AR 、PCNA 及Acta1 mRNA 表達(dá)的改變有明顯正相關(guān)；ErαmRNA表達(dá)與AR 、PCNA 及Acta1 mRNA表達(dá)不存在統(tǒng)計學(xué)相關(guān)性。