β-興奮劑克倫特羅、沙丁胺醇的免疫檢測方法研究.pdf

1、克倫特羅(Clenbuterol，CBL)、沙丁胺醇(Salbutamol，SAL)等β-興奮劑由于對人體的毒副作用已被各國禁止在畜牧業(yè)使用。目前對其分析監(jiān)控主要采用二步法：ELISA法篩選和GC-MS法確證相結(jié)合。ELISA法具有分析速度快、靈敏度高、樣品處理簡單等特點，特別適合大批量樣品的快速篩選。 傳統(tǒng)ELISA多以酶標板為載體，本文旨在以抗CBL、SAL抗體的制備為基礎(chǔ)，建立磁性微粒為載體的CBL、SAL的免疫檢測方法，

2、并對磁性微粒和酶標板為載體的檢測效果進行比較，以期開發(fā)新的固相載體材料用于β-興奮劑檢測。 以重氮化法將CBL分別和載體蛋白BSA、OVA偶聯(lián)，以偶聯(lián)物CBL-BSA免疫新西蘭兔，所得抗血清先經(jīng)飽和硫酸銨沉淀和DEAE-纖維素陰離子交換層析初步純化，然后以金磁微粒為載體包被BSA，通過親和吸附法進一步除去抗CBL多抗中針對載體蛋白BSA的抗體，得到純度較高的針對CBL的抗體；以制備的抗體為基礎(chǔ)，對CBL的間接競爭酶聯(lián)免疫檢測(I

3、C-EIA)方法進行了初步研究，檢測線性范圍為1.5～121.5ng/mL，IC50為22ng/mL。 通過SAL與丁二酸酐的醇解反應(yīng)制備SAL的琥珀酸衍生物，采用混合酸酐法分別將其和載體蛋白BSA、OVA偶聯(lián)，以偶聯(lián)物SAL-BSA免疫新西蘭兔，所得抗血清中針對載體蛋白的抗體效價很低，故只經(jīng)簡單的飽和硫酸銨沉淀和DEAE-纖維素陰離子交換層析純化，得到純度較高的針對SAL的抗體。 以純化的抗SAL多抗為基礎(chǔ)，酶標板為載

4、體建立SAL的IC-EIA方法，線性范圍為0.5～10.0ng/mL，IC50為5.29ng/mL，抗SAL多抗和CBL有較明顯的交叉反應(yīng)，達39.6％，故可同時用于CBL的檢測，檢測線性范圍為0.5～50ng/mL，IC50為13.37ng/mL。以購買的抗SAL單抗為基礎(chǔ)，磁性微粒為載體建立SAL的“一步法”IC-EIA，檢測時間2h，線性范圍0.5～100ng/mL，IC50為11.19ng/mL，不同豬樣品的平均添加回收率為84