鹽酸克倫特羅快速檢測(cè)方法研制及應(yīng)用.pdf

1、為了建立快速、簡(jiǎn)單、方便的克倫特羅（Clenbuterol，CL）檢測(cè)方法，本試驗(yàn)采用重氮法將CL與牛血清白蛋白（Bovine serum albumin，BSA）、卵清白蛋白（Ovalbumin，OVA）偶聯(lián)，產(chǎn)生免疫原CL-BSA，包被抗原CL-OVA，以CL-BSA作為免疫原，用等劑量的福氏完全佐劑乳化CL-BSA，免疫6周齡BALB/C小鼠。試驗(yàn)?zāi)康模海?）通過(guò)制備高效價(jià)的CL多克隆抗體，構(gòu)建克倫特羅酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)試劑盒；（2

2、）運(yùn)用雜交瘤技術(shù)，分離CL單克隆抗體，構(gòu)建克倫特羅膠體金檢測(cè)試紙條。
　　 1、CL酶聯(lián)吸附檢測(cè)試劑盒
　　 小鼠經(jīng)CL-BSA多次免疫后，分離小鼠血清，得抗血清效價(jià)為128000，與萊克多巴胺（Ractopamine，Rac）、沙丁胺醇（Salbutamol，Sal）交叉反應(yīng)率為0.1％，具有很強(qiáng)的特異性。用CL抗血清建立了CL間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA法，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程logity=-0.8756x+1.6958，相

3、關(guān)系數(shù)為0.995，可檢測(cè)范圍為1ng/mL-10μg/mL，并檢測(cè)出飼喂了含CL豬的尿樣中含有CL。
　　 2、CL膠體金檢測(cè)試紙條
　　 小鼠經(jīng)CL-BSA加強(qiáng)免疫后3天，取小鼠脾細(xì)胞，利用聚乙二醇（PEG）4000將其與骨髓瘤細(xì)胞SP2/0進(jìn)行融合，制備雜交瘤細(xì)胞。經(jīng)過(guò)對(duì)培養(yǎng)上清的篩選和雜交瘤細(xì)胞的克隆化，最終得到3株能分泌克倫特羅抗體的雜交瘤細(xì)胞株：1A1、1B5、和2H9。用間接ELISA法測(cè)得雜交瘤培養(yǎng)上清效

4、價(jià)分別達(dá)到1:2000、1:1200、1:800。最后用擴(kuò)大培養(yǎng)所得的雜交瘤細(xì)胞誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生產(chǎn)生腹水，制備單克隆抗體。
　　 CL檢測(cè)試紙條的研制：本試驗(yàn)利用CL單抗標(biāo)記40nm膠體金，標(biāo)記膠體金穩(wěn)定。將標(biāo)記膠體金、CL-OVA和羊抗鼠免疫球蛋白G（IgG）噴涂在硝酸纖維膜（NC）膜上，CL-OVA條帶作為檢測(cè)線，羊抗鼠IgG條帶作為質(zhì)控線，制備得到可快速檢測(cè)鹽酸克倫特羅的膠體金檢測(cè)試紙條。將待測(cè)樣品滴在試紙條吸樣品區(qū)，在毛細(xì)管