鹽酸克倫特羅時(shí)間分辨熒光免疫分析方法的建立.pdf

1、食品安全問(wèn)題已經(jīng)成為當(dāng)今世界關(guān)注的焦點(diǎn)問(wèn)題之一。近年來(lái)，鹽酸克倫特羅(CBL)殘留致使食物中毒的報(bào)道屢見(jiàn)報(bào)端，嚴(yán)重危害了人們的健康與生命。時(shí)間分辨熒光免疫分析方法(TRFIA)是近十年發(fā)展起來(lái)的一種新興的非放射性免疫標(biāo)記技術(shù)，具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)，并且非常適合大規(guī)模樣品的篩選。 本論文旨在開(kāi)發(fā)具有我國(guó)自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的高靈敏、快速檢測(cè)CBL的TRFIA試劑盒。首先，重氮化的CBL分別與血藍(lán)蛋白(KLH)和卵清蛋白(

2、OVA)交聯(lián)，合成免疫抗原CBL-KLH和包被抗原CBL-OVA。免疫原CBL-KLH按免疫程序免疫新西蘭大白兔，產(chǎn)生的抗血清效價(jià)高達(dá)1：204800。以此抗體為基礎(chǔ)，設(shè)計(jì)了間接競(jìng)爭(zhēng)兩步TRFIA(CBL-TRFIA)方法：固相CBL與游離CBL共同競(jìng)爭(zhēng)有限的抗CBL抗體，用稀土離子Eu3＋標(biāo)記的羊抗兔抗體進(jìn)行示蹤。研制出可方便得應(yīng)用于各個(gè)實(shí)驗(yàn)室中的間接競(jìng)爭(zhēng)CBL-TRFIA檢測(cè)試劑盒。此TRFIA試劑盒靈敏度達(dá)到：0.0076μg/L