動物性食品中鹽酸克倫特羅免疫快速檢測技術(shù)的建立及應(yīng)用.pdf

1、鹽酸克倫特羅(clenbuterol,CL),俗名“瘦肉精”,是一種β-腎上腺素受體激動劑,因具有增加動物酮體瘦肉率、提高飼料轉(zhuǎn)化率的作用,常常被非法作為飼料添加劑用于畜產(chǎn)品的生產(chǎn)。近幾年來,CL殘留致使食物中毒的報道屢見報端,嚴(yán)重?fù)p害了人們的健康。雖然國家的政策法規(guī)己經(jīng)嚴(yán)令禁止使用鹽酸克倫特羅作為飼料添加劑,但仍有違規(guī)應(yīng)用。因此,為保證肉品質(zhì)量和人類的健康,建立準(zhǔn)確、快速、簡便的檢測鹽酸克倫特羅殘留的方法具有重要的意義。本文通過研制針

2、對CL的多克隆抗體,初步建立了檢測CL的間接競爭酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)和膠體金標(biāo)記免疫分析法,兩種方法對CL的殘留快速檢測具有良好的特異性和靈敏性。
　　 利用重氮化法將CL分別與牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)和卵清白蛋白(ovalbumin,OVA)通過化學(xué)方法進行偶聯(lián),制備出免疫原CL-BSA和包被原CL-OVA。將免疫原CL-BSA與等體積的弗氏佐劑充分混勻后,背部脊髓兩側(cè)多點免疫6

3、-8周齡的新西蘭大耳白。多次免疫后,兔子產(chǎn)生的抗血清效價高達(dá)1:12800,將血清分別經(jīng)過飽和硫酸銨沉淀法和免疫親和層析法進行純化后,得到特異性的CL抗體。以純化的抗體為基礎(chǔ),建立了CL的間接競爭酶聯(lián)免疫吸附法。試驗表明,該方法在0.32ng／mL-200ng／mL范圍內(nèi),IC50為2.18ng／mL,IC15為0.05ng／mL,對沙丁胺醇,妥洛特羅和萊克多巴胺的交叉反應(yīng)率分別為8.28％、7.75％和5.26％,表明此方法具有較高的

4、特異性,并對方法的重現(xiàn)性、精確度、靈敏度等進行了評價。在樣品的實際檢測中,分別對豬肉、牛肉、羊肉和豬肝進行了檢測,消除了基質(zhì)影響,樣本組織回收率為73.6％-90.0％,并采用GC-MS法對所建立的ELISA方法進行了比較和驗證,兩種方法呈現(xiàn)出良好的線性關(guān)系,相關(guān)系數(shù)R2為0.974。結(jié)果證明,所建立的間接競爭ELISA方法各項參數(shù)均能達(dá)到實際檢測的需要。
　　 建立了以膠體金標(biāo)記抗體為基礎(chǔ)的免疫快速檢測技術(shù)檢測CL,以硝酸纖維