動物性食品中獸藥殘留檢測方法研究及濟南市售動物性食品中獸藥殘留市場調查.pdf

1、目的:
　　 食品安全關系到人體的健康、經(jīng)濟的發(fā)展以及社會的穩(wěn)定，隨著獸藥在養(yǎng)殖業(yè)的應用，其毒副作用隨之顯現(xiàn)出來，對食品安全構成潛在威脅，因此對獸藥殘留進行監(jiān)測，在保障食品安全、保護人群健康等方面具有重要意義。目前對濟南市區(qū)市售動物性食品中涵蓋多種獸藥殘留的現(xiàn)狀調查鮮有報道，為了解濟南市區(qū)市售動物性食品中獸藥殘留安全現(xiàn)狀，本研究擬建立一系列準確、靈敏、高效、穩(wěn)定且能同時檢測同一類獸藥殘留的高效液相色譜法，同時制定科學、合理的隨機

2、采樣方法，對濟南市售動物性食品中的四類10種獸藥[四環(huán)素類(Tetracyclines，TCs)包括土霉素(Oxytetracycline，OTC)、四環(huán)素(Tetracycline，TC)、金霉素(Chlortetracycline，CTC)，磺胺類(Sulfonamides，SAs)包括磺胺嘧啶(Sulfadizazine，SD)、磺胺二甲基嘧啶(Sulfamethoxazole，SM2)、磺胺甲噁唑(Sulfamethoxazol

3、e，SMZ)，喹諾酮類(Quinolones，QNs)包括氧氟沙星(Ofloxacin，OFL)、環(huán)丙沙星(Ciprofloxacin, CIP)、恩諾沙星(Enrofloxacin，ENR)，鹽酸克倫特羅(ClenbuterolHydrochloride，CL)]殘留進行調查，對超標情況進行分析，從而了解濟南市區(qū)市售動物性食品中的獸藥殘留水平及現(xiàn)狀，繼而制定相應監(jiān)管措施、為消費者安全食用動物性食品提供指導建議。
　　 方法:<

4、br>　　 1動物性食品中四類獸藥殘留檢測方法學研究
　　 1.1四環(huán)素類獸藥殘留檢測方法
　　 1.1.1樣品處理
　　 切碎勻漿后的樣品用5％高氯酸溶液沉淀蛋白，加入EDTA-McIlvaine緩沖溶液消除金屬離子的干擾，經(jīng)離心、濃縮后，加乙腈-水(6∶4)溶解殘渣，采用高效液相色譜-紫外檢測法(HPLC-UV)檢測。
　　 1.1.2色譜條件
　　 色譜柱:Agilent C18柱（150

5、 mm×5 mm，4.6μm）;流動相:乙腈+0.01 mol/L磷酸二氫鈉(pH=2.5);柱溫:25℃;檢測波長:273 nm;流速:1.2 ml/min;進樣量:20μl;色譜柱清潔和平衡時間約為5 min。洗脫梯度程序:0～3 min，乙腈:0.01 mol/L磷酸二氫鈉=13∶87(V∶V);3～12min，乙腈:0.01 mol/L磷酸二氫鈉=25∶75（V∶V）。
　　 1.2磺胺類獸藥殘留檢測方法
　　

6、1.2.1樣品處理
　　 切碎勻漿后的樣品經(jīng)乙腈提取，提取液離心后上清液經(jīng)萃取去除雜質，萃取液經(jīng)濃縮后，流動相定容，采用高效液相色譜-紫外檢測法(HPLC-UV)檢測。
　　 1.2.2色譜條件
　　 色譜柱:SHIMADZU VP-ODS C18(250 mm×4.6 mm，4.6μm);流動相:乙腈:1％乙酸溶液=22∶78（V∶V）;流速:1.2 ml/min;柱溫:25℃;進樣量:20μl;檢測波長:26

7、8 nm。
　　 1.3喹諾酮類獸藥殘留檢測方法
　　 1.3.1樣品處理
　　 切碎勻漿后的樣品經(jīng)酸化后的乙腈，超聲提取，正己烷多次萃取除去雜質，樣品濃縮后加乙腈-水(8∶2)溶解，采用高效液相色譜-紫外檢測法(HPLC-UV)檢測。
　　 1.3.2色譜條件
　　 色譜柱:SHIMADZUVP-ODS C18柱(250 mm×4.6 mm，4.6μm);流動相:乙腈+0.01 mol/L磷酸二

8、氫鈉溶液(pH=4.0)，柱溫:25℃;檢測波長:279 nm;進樣量:20μl;梯度洗脫程序為:0～2 min，乙腈:0.01 mol/L NaH2PO4=1∶99（V∶V），流速:1.0 ml/min;2～2.5 min，乙腈:0.01 mol/L NaH2PO4=13∶87（V∶V），流速:1.1 ml/min;2.5～16.5 min，乙腈:0.01 mol/L NaH2PO4=13∶87（V:V），流速:1.2ml/min。3

9、0％乙腈清潔和1％乙腈平衡色譜柱的時間約為10 min。
　　 1.4鹽酸克倫特羅獸藥殘留檢測方法
　　 1.4.1樣品處理
　　 切碎勻漿后的樣品經(jīng)0.1 mol/L高氯酸沉淀蛋白，超聲提取，上清液用1 mol/LNaOH溶液調節(jié)pH值至8.7，用異丙醇-乙酸乙酯(40∶60)萃取，萃取液濃縮后，甲醇溶解殘渣定容，采用高效液相色譜-紫外檢測法(HPLC-UV)檢測。
　　 1.4.2色譜條件
　　

10、 色譜柱:Agilent C18柱（150 mm×5 mm，5μm）;流動相:甲醇∶磷酸二氫鈉(0.01 mol/L，pH=5.5)=55∶45（V∶V）;柱溫:25℃;流速:1.0 ml/min;檢測波長:301 nm;進樣量20μl。
　　 2濟南市售動物性食品中獸藥殘留市場調查
　　 2.1樣品采集方法
　　 2012年3月至5月，選擇濟南市區(qū)的五個行政區(qū)作為采樣區(qū)域，每個行政區(qū)內，隨機選取兩個人口較集中

11、的居民區(qū)，每個居民區(qū)周邊隨機選擇居民常去購物的超市和農貿市場作為采樣點。在超市和農貿市場里隨機采購品牌和非品牌肉制品（品牌商標的界定參考中國肉業(yè)網(wǎng)-2011中國最受消費者喜愛的十大肉制品、十大豬肉、十大雞肉、十大牛肉、十大羊肉品牌，上述之外的商標歸為非品牌），每種動物性食品隨機購買兩份。
　　 2.2檢測項目
　　 本研究擬檢測10種獸藥，分別是土霉素(OTC)、四環(huán)素(TC)、金霉素(CTC)，磺胺嘧啶(SD)、磺胺二

12、甲基嘧啶(SM2)、磺胺甲噁唑(SMZ)，氧氟沙星(OFL)、環(huán)丙沙星(CIP)、恩諾沙星(ENR)，鹽酸克倫特羅(CL)。
　　 2.3樣品種類及數(shù)量
　　 每類獸藥均檢測272份動物性食品，其中豬肉各45份、豬肝各40份、豬腎各32份、雞肉各41份、雞肝各30份、雞胗各34份、牛肉各40份、羊肉各10份。
　　 2.4數(shù)據(jù)處理與比較
　　 保留時間定性，標準曲線法求得樣品中獸藥殘留的含量。所得值與農業(yè)

13、部235號公告《動物性食品中獸藥最高殘留限量》比較。
　　 2.5統(tǒng)計學分析
　　 采用SPSS18.0統(tǒng)計軟件進行分析，數(shù)據(jù)之間的比較采用＃檢驗，P＜0.05認為有統(tǒng)計學意義。
　　 結果:
　　 1動物性食品中四類獸藥殘留檢測方法學研究
　　 1.1四環(huán)素類獸藥殘留檢測方法
　　 1.1.1檢測波長和保留時間
　　 三種TCs獸藥在273 nm處有較強的吸收峰。OTC、TC、C

14、TC得到了較好的分離，峰形良好，左右對稱。保留時間依次是OTC(5.81 min)、TC(7.10 min)、CTC(8.98 min)。
　　 1.1.2線性關系
　　 土霉素回歸方程為Y=1.04×105X—4208.45，r=0.99977;四環(huán)素回歸方程為Y=1.16×105X—2605.42，r=0.99998;金霉素回歸方程為Y=5.61×104X—8848.75，r=0.99928;線性范圍均為0.2～5.

15、0μg/ml。1.1.3加標回收率和精密度
　　 三種不同加標濃度的土霉素，加標回收率為87.13％～95.33％、日內精密度（RSD日內）為2.71％～3.24％、日間精密度（RSD日間）為3.47％～4.79％;三種不同加標濃度的四環(huán)素，加標回收率為89.24％～102.62％、日內精密度（RSD日內）為2.33％～3.84％，日間精密度（RSD聃）為3.58％～4.54％;三種不同加標濃度的金霉素，加標回收率為91.51％

16、～103.22％、日內精密度(RSD日內)為2.94％～3.28％、日間精密度(RSD日間)為3.80％～4.47％。
　　 1.1.4檢測限
　　 土霉素檢測限為3.44×10-3μg/ml;四環(huán)素檢測限為3.67×10-3μg/ml;金霉素檢測限為4.65×103μg/ml。
　　 1.2磺胺類獸藥殘留檢測方法
　　 1.2.1檢測波長和保留時間
　　 三種SAs獸藥在268nm處有較強的吸收

17、峰。SD、SM2、SMZ得到了較好的分離，峰形良好。保留時間依次是SD(3.61 min)、SM2(4.96 min)、SMZ(9.32min)。
　　 1.2.2線性關系
　　 磺胺嘧啶回歸方程為Y=2.27×105X+3239.58，r=0.99987;磺胺二甲基嘧啶回歸方程為Y=1.85×105X+2144.72，r=0.99998;磺胺甲噁唑回歸方程為Y=2.35×105X+5519.98，r=0.99987;線

18、性范圍均為0.001～0.2μg/ml。
　　 1.2.3加標回收率和精密度
　　 三種不同加標濃度的磺胺嘧啶，加標回收率為97.14％～101.79％、日內精密度（RSD日內）為3.24％～4.70％、日間精密度（RSD日間）為2.89％～3.34％;三種不同加標濃度的磺胺二甲基嘧啶，加標回收率為95.49％～100.57％、日內精密度（RSD日內）為3.21％～3.83％、日間精密度（RSD日間）為2.93％～3.3

19、8％;三種不同加標濃度的磺胺甲噁唑，加標回收率為96.82％～101.84％、日內精密度（RSD日內）為3.03％～3.45％、日間精密度（RSD日間）為2.65％～3.08％。
　　 1.2.4檢測限
　　 磺胺嘧啶檢測限為7.12×10-4μg/ml;磺胺二甲嘧啶檢測限為8.73×10-4μg/ml;磺胺甲噁唑檢測限為8.91×10-4μg/ml。
　　 1.3喹諾酮類獸藥殘留檢測方法
　　 1.3.

20、1檢測波長和保留時間
　　 三種QNs獸藥在279 nm處有較強的吸收峰。OFL、CIP、ENR得到了較好的分離，峰形尖銳，左右對稱。保留時間依次為OFL(11.92 min)、CIP(12.86 min)、ENR(16.21 min)。
　　 1.3.2線性關系
　　 氧氟沙星回歸方程為Y=2.62×105X—1353.21，r=0.99980;環(huán)丙沙星回歸方程為Y=5.16×105X+87.15，r=0.99

21、976;恩諾沙星回歸方程為Y=1.32×106X—640.96，r=0.99963;線性范圍均為0.01～0.2μg/ml。
　　 1.3.3加標回收率和精密度
　　 三種不同加標濃度的氧氟沙星，加標回收率為89.27％～99.95％、日內精密度（RSD日內）為2.98％～3.74％、日間精密度(RSD日間)為3.37％～4.90％;三種不同加標濃度的環(huán)丙沙星，加標回收率為88.32％～97.31％、日內精密度（RSD日

22、內）為2.32％～3.15％、日間精密度（RSD日間）為3.53％～4.54％;三種不同加標濃度的恩諾沙星，加標回收率為89.51％～101.52％、日內精密度（RSD日內）為2.77％～3.23％、日間精密度（RSD日間）為3.72％～4.37％。
　　 1.3.4檢測限
　　 氧氟沙星檢測限為2.71×10-3μg/ml，環(huán)丙沙星檢測限為1.39×10-3μg/ml，恩諾沙星檢測限為6.52×10-4μg/ml。

23、r>　　 1.4鹽酸克倫特羅獸藥殘留檢測方法
　　 1.4.1檢測波長和保留時間
　　 CL在301 nm處有較強的吸收峰。CL與雜峰得到了較好的分離，峰形良好。保留時間為6.52 min。
　　 1.4.2線性關系
　　 鹽酸克倫特羅回歸方程為Y=3.43×104X—1084.70，r=0.99984;線性范圍為0.2～10.0μg/ml。
　　 1.4.3加標回收率和精密度
　　 三

24、種不同加標濃度的鹽酸克倫特羅，加標回收率為92.86％～100.93％、日內精密度(RSD日內)為3.34％～3.70％、日間精密度(RSD日間)為3.76％～4.03％。
　　 1.4.4檢測限
　　 鹽酸克倫特羅檢測限為4.83×10-4μg/ml。
　　 2濟南市售動物性食品中獸藥殘留監(jiān)測結果
　　 2.1.四環(huán)素類獸藥殘留情況
　　 2.1.1動物性食品中三種TCs獸藥殘留超標率及殘留超標

25、值范圍
　　 272份動物性食品中，CTC殘留超標率最高，為31.25％，超標殘留值范圍為512.50～1747258.73μg/kg; TC殘留超標率為26.10％，超標殘留值范圍為169.72～271833.91μg/kg; OTC殘留超標率為24.26％，超標殘留值范圍為118.88～60139.67μg/kg。8種動物性食品中都不同程度的檢出了三種TCs獸藥，其中肝、腎超標率較高。雞胗中TC超標殘留值范圍為327.44～

26、30626.39μg/kg，P75的超標殘留值為11777.87μg/kg;雞胗中CTC超標殘留值范圍為1668.62～476600.78μg/kg，P75的超標殘留值為29262.18μg/kg;雞肝中OTC超標殘留值范圍為329.95～60139.67μg/kg，P75的超標殘留值為49802.84μg/kg;豬肉中CTC超標殘留值范圍為512.50～23291.80μg/kg，P75的超標殘留值為18116.10μg/kg;牛肉中

27、CTC超標殘留值范圍為1155.07～1747258.73μg/kg，P75的超標殘留值為150514.92μg/kg;超標殘留值范圍較寬，殘留超標值較高，超標嚴重。其余動物性食品中三種TCs獸藥殘留超標值范圍也較寬，但大部分樣品殘留值均集中在較小的范圍內，超標值相對較低。
　　 2.1.2不同采樣點各動物性食品三種TCs獸藥殘留超標情況
　　 檢測TCs類獸藥所購得的動物性食品，超市采樣為128份，農貿市場采樣144份

28、。超市出售的羊肉TC超標率為0，農貿市場出售的羊肉TC、OTC、CTC超標率均為0。超市出售的牛肉TC超標率高于農貿市場出售的牛肉TC超標率，經(jīng)統(tǒng)計學分析，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 2.1.3品牌與非品牌動物性食品三種TCs獸藥殘留超標情況
　　 272份動物性食品中，購得品牌動物性食品為107份，購得非品牌動物性食品為165份，品牌和非品牌動物性食品中三種TCs獸藥殘留超標率均較高。非品牌牛肉中TC超

29、標率低于品牌牛肉，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);非品牌牛肉中CTC超標率低于品牌牛肉，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 2.2磺胺類獸藥殘留情況
　　 2.2.1動物性食品中三種SAs獸藥殘留超標率及殘留超標值范圍
　　 272份動物性食品中，SD殘留超標率最高，為43.38％，超標殘留值范圍為103.22～37430.31μg/kg; SM2殘留超標率為20.96％，超標殘留值范圍為125.35

30、～67420.41μg/kg; SMZ殘留超標率為19.85％，超標殘留值范圍為109.95～32538.85μg/kg。10份羊肉中，SD和SMZ的超標率均為0，其中的2份羊肉SM2超標。其余7種動物性食品中都不同程度的檢出了三種磺胺類獸藥，肝、腎超標率較高，且此7種動物性食品中SD的超標率均高于SM2和SMZ。雞肝中SM2超標殘留值范圍為127.08～26078.25μg/kg，P75的超標殘留值為10722.13μg/kg;牛肉中

31、SMZ超標殘留值范圍為109.95～32538.85μg/kg，P75的超標殘留值為22886.44μg/kg;此兩種動物性食品超標殘留值范圍較寬，超標殘留值較高。豬肝中SM2超標殘留值范圍為162.83～19401.09μg/kg，P75的超標殘留值為2294.08μg/kg;雞肝中SD超標殘留值范圍為117.68～37430.31μg/kg，P75的超標殘留值為2515.52μg/kg;牛肉中SM2超標殘留值范圍為146.35～67

32、420.41μg/kg，P75的超標殘留值為2556.25μg/kg;三者超標值范圍雖也較寬，但大部分樣品殘留值相對較低。其余動物性食品殘留超標值范圍較小，超標值相對較低。
　　 2.2.2不同采樣點各動物性食品中三種SAs獸藥殘留超標情況
　　 檢測SAs類獸藥所購得的動物性食品，超市采樣為128份，農貿市場采樣144份。超市出售的豬肉SM2超標率為0，超市出售的雞肉SMZ超標率為0，超市出售的羊肉SD、SM2、 SM

33、Z超標率均為0，農貿市場出售的羊肉SD、SMZ超標率為0。超市出售的豬肝SM2超標率低于農貿市場出售的豬肝SM2超標率，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);超市出售的雞肝SMZ超標率高于農貿市場出售的雞肝SMZ超標率，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);超市出售的雞胗SD超標率低于農貿市場出售的雞胗SD超標率，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);超市出售的雞胗SM2超標率高于農貿市場出售的雞胗SM2超標率，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.0

34、5)。
　　 2.2.3品牌與非品牌動物性食品中三種SAs獸藥殘留超標情況
　　 272份動物性食品中，品牌動物性食品為107份，非品牌動物性食品為165份。品牌豬肉、豬腎、雞肉的SM2超標率為0;品牌牛肉中SM2的超標率為100％;非品牌羊肉中SD、SMZ殘留超標率為0。品牌豬肝中SM2、 SMZ超標率低于非品牌豬肝中SM2、 SMZ超標率，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);品牌豬腎中SD、SM2超標率低于非品牌豬腎中

35、SD、SM2超標率，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);品牌牛肉中SM2、 SMZ超標率高于非品牌牛肉中SM2、 SMZ超標率，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　 2.3喹諾酮類獸藥殘留情況
　　 2.3.1動物性食品中三種QNs獸藥殘留超標率及殘留超標值范圍
　　 272份動物性食品中，CIP殘留超標率最高，為17.28％，超標殘留值范圍為103.18～5517.76μg/kg;其次是OFL，超標率為16.

36、18％，超標殘留值范圍為136.37～7246.79μg/kg; ENR超標率最低，為4.04％，超標殘留值范圍為122.65～8820.62μg/kg;10份羊肉中，CIP的超標率為0，2份羊肉OFL超標，1份羊肉ENR超標;豬肉、雞肝和雞胗中ENR超標率均為0;其余動物性食品中都不同程度的檢出了三種QNs獸藥，其中肝、腎超標率較高;8種動物性食品中ENR檢出率較低，均在10％以下。豬肉中CIP超標殘留值范圍為105.63～5517.

37、76μg/kg，P75的超標殘留值為4226.86μg/kg;雞胗中OFL超標殘留值范圍為888.12～26134.75μg/kg，P75的超標殘留值為25568.66μg/kg;牛肉中OFL超標殘留值范圍為1313.68～7246.79μg/kg，P75的超標殘留值為6527.27μg/kg;羊肉中ENR超標殘留值為8820.62μg/kg;此四者超標殘留值范圍較寬，超標殘留值較高。上述之外的其余動物性食品中殘留超標值范圍較小，超標值

38、相對較小。
　　 2.3.2不同采樣點各動物性食品中三種QNs獸藥殘留超標情況
　　 檢測QNs獸藥所購得的動物性食品，超市采樣為128份，農貿市場采樣144份。超市出售的豬肉、豬肝、雞肝、雞胗中ENR的超標率為0;超市出售的羊肉中OFL、CIP超標率為0;農貿市場出售的豬肉、雞肉、雞肝、雞胗中ENR超標率為0，農貿市場出售的羊肉中CIP、ENR超標率為0。超市出售的豬肝中 ENR超標率低于農貿市場出售豬肝中ENR超標率

39、，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 2.3.3品牌與非品牌動物性食品中三種QNs獸藥殘留超標情況
　　 272份動物性食品中，品牌動物性食品為107份，非品牌動物性食品為165份。品牌豬肉、豬肝、豬腎、雞肉、雞胗中ENR超標率為0;品牌雞肝中OFL、CIP、ENR超標率均為0;非品牌豬肉、雞肝、雞胗中ENR超標率為0;非品牌羊肉中CIP殘留超標率為0。品牌豬肝中ENR超標率低于非品牌肝中ENR超標率，差異有統(tǒng)計

40、學意義(P＜0.05);品牌牛肉中OFL、CIP超標率高于非品牌牛肉中OFL、CIP超標率，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 2.4鹽酸克倫特羅獸藥殘留情況
　　 272份動物性食品中，CL超標率為10.29％，超標率較高，超標殘留值范圍為4626.18～119875.70μg/kg。羊肉中沒有檢測出CL，豬腎中CL獸藥殘留超標率最高，為21.88％，其次為雞肉，超標率為17.07％;豬肝和雞胗中CL獸藥殘留超標

41、率也較高，分別為10％和11.76％;牛肉中檢測出了CL，超標率為5％。農貿市場出售的豬腎、雞肉中CL殘留檢出率較高，分別為22.22％和28.57％，高于超市出售的豬腎和雞肉;超市出售的豬肝、雞胗CL殘留檢出率較高，分別為15％和16.67％，高于農貿市場出售的豬肝和雞胗。雖動物性食品中CL超標率較低，但除羊肉之外的動物性食品中殘留值均較高，豬肝中CL超標殘留值范圍為12397.12～119875.70μg/kg，P75的超標殘留值為

42、95657.76μg/kg;豬腎中CL超標殘留值范圍為4671.87～36707.76μg/kg，P75的超標殘留值為14063.09μg/kg;雞肉中CL超標殘留值范圍為4355.12～32959.84μg/kg，P75的超標殘留值為32224.39μg/kg;雞肝中CL超標殘留值范圍為21617.85～58741.04μg/kg;雞胗中CL超標殘留值范圍為4736.72～28123.56μg/kg，P75的超標殘留值為22448.9

43、1μg/kg。
　　 結論:
　　 1建立的分別檢測TCs、SAs、QNs、CL四類獸藥的四種高效液相色譜法適合動物性食品的快速、靈敏、準確、批量檢測。
　　 2市售動物性食品中10種獸藥的超標率較高，超標率最高的獸藥是磺胺嘧啶(SD)，超標率為43.38％;超標率最低的獸藥是恩諾沙星(ENR)，超標率為4.04％; CL是禁止檢出的獸藥，其檢出率為10.29％。
　　 38種動物性食品中，羊肉中獸藥殘留

44、的超標率相對較小，超標殘留值相對較低;其余7種動物性食品中獸藥殘留的超標率較高，殘留量較大;其中，肝、腎、雞胗器官超標現(xiàn)象嚴重。
　　 4超市出售的動物性食品和農貿市場的比較，同種動物性食品同一獸藥殘留超標率高低無明顯規(guī)律，大多數(shù)動物性食品中同一種獸藥殘留超標率無統(tǒng)計學差異;品牌動物性食品和非品牌的動物性食品比較，同種動物性食品同一獸藥殘留超標率高低亦無明顯規(guī)律，大多數(shù)動物性食品中同一種獸藥殘留超標率無統(tǒng)計學差異。