動物性食品中玉米赤霉醇ELISA快速檢測方法的研究.pdf

1、近年來，真菌毒素對食品的污染越來越嚴重，其中因玉米赤霉醇(ZER)所造成的污染已不容忽視。玉米赤霉醇及其代謝產(chǎn)物具有一定的雌激素作用，它隨食物鏈進入機體后，會造成機體生長發(fā)育障礙，對機體第二性征產(chǎn)生影響。我國農(nóng)業(yè)部早在2002年就明確禁止玉米赤霉醇作為增重劑用于畜禽養(yǎng)殖。目前，用于食品及飼料中ZER的檢測方法主要有薄層色譜法、高效液相色譜法和免疫分析技術(shù)。薄層色譜法只能用于定性分析；高效液相色譜法的前處理過程復雜，需要專業(yè)人員操作，應用

2、大量的有毒有機溶劑，使其應用受到一定的限制。而ELISA免疫分析技術(shù)具有快速、靈敏、簡便、特異等優(yōu)點，正好可以彌補上述方法的不足，已被成功運用于食品和飼料中真菌毒素的快速檢測。
　　1、玉米赤霉醇人工抗原的合成及多抗血清的制備
　　針對ZER第十六位上的羥基進行改造，設計并合成半抗原ZER-16-羧丙基丁醚。分別采用混合酸酐法和碳二亞胺(EDC)法將改造后的半抗原與載體蛋白BSA和OVA偶聯(lián)，制備出人工免疫抗原ZER-BSA

3、和人工檢測抗原ZER-OVA。經(jīng)SDS-PAGE電泳鑒定，偶聯(lián)蛋白在凝膠上的遷移距離比載體蛋白小，故偶聯(lián)成功。之后免疫小鼠并成功制備出效價達1:2.56×104、IC50為15.77ng/mL的鼠源多抗血清。
　　2、玉米赤霉醇單克隆抗體的制備及其特性鑒定
　　成功獲得高效ZER多抗血清后，采用單克隆抗體技術(shù)和細胞融合技術(shù)將有效小鼠的脾細胞與SP/20骨髓瘤細胞進行融合，多次亞克隆后篩選出了三株能夠穩(wěn)定分泌ZERmAb的雜交

4、瘤細胞株，分別為6B2E6、6B2E11和12B10A7，其細胞上清效價可達1:2.56×104、1:5.12×104和1:2.56×104。將敏感性最好的12B10A7細胞株注射到處理過的小鼠腹腔內(nèi)，收集到的腹水效價為1:6.4×105。所得單抗經(jīng)鑒定為IgG1型，親和常數(shù)Ka為4.7×1011L/mol，回歸方程為y=-0.3796x+0.7746，相關系數(shù)R2=0.9885，IC50=0.529ng/mL。ZERmAb與黃曲霉毒素

5、B1（AFB1）、伏馬菌素B1（FB1）等非同類毒素的交叉反應率低，均小于0.5％。該細胞株不論是體外傳代還是凍存復蘇后都能穩(wěn)定地分泌抗體。
　　3、ZER間接競爭ELISA檢測分析法的建立及在動物性食品中ZER殘留檢測的應用
　　通過反復的ELISA檢測試驗，確定了抗原最佳包被濃度為1:2000倍稀釋，抗體最佳工作濃度在1:10000倍稀釋，建立了ZER間接競爭ELISA檢測方法，用此方法對動物性食品中ZER殘留進行檢測，