酸棗仁中黃酮類化學成分及質(zhì)量分析方法研究.pdf

1、中藥酸棗仁（Semen Ziziphi Spinosae）是鼠李科（Rhamnaceae）植物酸棗（Ziziphous jujuba Mill.var.spinosa（Bunge）Hu.et H.f.Chou）的干燥成熟種仁，臨床多用于治療失眠和焦慮癥。已報道的酸棗仁化學成分主要包括黃酮、皂苷、脂肪油、有機酸等。而現(xiàn)代藥理學研究表明，黃酮類化合物是其主要的活性成分，具有鎮(zhèn)靜催眠的作用。所以，酸棗仁中黃酮類化合物的快速分離鑒定，以及多成分

2、的定量分析，對藥材的質(zhì)量控制和保證臨床用藥的安全有效具有重要意義。
　　 從酸棗仁藥材中分離得到5個黃酮類化合物，依據(jù)其UV、NMR、HRMS及MSn數(shù)據(jù)確定了化合物結(jié)構(gòu)，分別為斯皮諾素（spinosin），6"'-阿魏酰斯皮諾素（6"'-feruloylspinosin），6"'-對羥基苯甲酸斯皮諾素（6'"-p-hydroxybenzoylspinosin），6"'-對香豆酰斯皮諾素（6"'-p-coumaroylspino

3、sin）和異牡荊素（isovitexin）。本實驗結(jié)果為進一步分離鑒定酸棗仁中的黃酮類化合物提供了基礎(chǔ)和依據(jù)。
　　 本論文建立了新的高效液相色譜-光電二極管矩陣檢測器/傅立葉變換離子回旋共振質(zhì)譜/多級質(zhì)譜技術(shù)方法（HPLC-PDA/FTICRMS/MSn）對酸棗仁提取物中的黃酮類化合物進行分離和鑒定。色譜條件為：HYPERSIL C18（4.6*250 mm，5μm）色譜柱，柱溫25℃，流動相為乙腈-0.1％乙酸水溶液梯度洗脫

4、，檢測波長270 nm，進樣量20μL，流速0.8 mL/min，分流比為7:3；質(zhì)譜條件為：ESI離子源正離子檢測模式，噴霧電壓3.5 kV，毛細管溫度275℃，毛細管電壓45 V，鞘氣流速35 arb，輔助氣流速10 arb，掃尾氣流速3 arb，Tube Lens94.5 V，掃描范圍為90～1000 Da。最終獲得19個黃酮類化合物的紫外光譜數(shù)據(jù)，精確分子量和多級質(zhì)譜數(shù)據(jù)，基于對對照品的多級質(zhì)譜數(shù)據(jù)分析，裂解規(guī)律的推測，以及文獻

5、數(shù)據(jù)對照，鑒定了10個黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)，其余9個化合物則暫定為黃酮類化合物。本文建立的方法有助于研究酸棗仁或其他中藥體系中的黃酮類化合物，尤其是含量較低的成分，對于明確酸棗仁藥材的活性成分和增強藥材的質(zhì)量控制具有重要意義。
　　 中草藥以多成分作為物質(zhì)基礎(chǔ)發(fā)揮藥效作用，多成分的快速、準確、靈敏的分析檢測技術(shù)和方法是中草藥成分分析和質(zhì)量評價的有力手段。本論文建立了快速、簡便的UHPLC（Ultra High Performanc

6、e Liquid Chromatography）方法用于酸棗仁提取物中黃酮類化合物的指紋圖分析，并同時測定了isovitexin、spinosin、swertisin、6"'-p-hydroxybenzoylspinosin、6"'-p-coumaroylspinosin和6"'-feruloylspinosin的含量。色譜條件為： Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18 RRHD（2.1*100 mm，1.8μ

7、m）色譜柱與Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18 RRHD（2.1*50 mm，1.8μm）色譜柱串聯(lián)，柱溫為40℃，流動相為乙腈-20 mM磷酸二氫鈉水溶液梯度洗脫，流速0.4 mL/min，檢測波長270 nm，進樣量1μL。Isovitexin的線性范圍為0.39-195.00μg/mL，spinosin的線性范圍為0.38-191.00μg/mL，swertisin的線性范圍為0.40-201.00μg

8、/mL，6"'-p-hydroxybenzoylspinosin的線性范圍為0.33-166.00μg/mL，6"'-p-coumaroylspinosin的線性范圍為0.39-198.00μg/mL，6"'-feruloylspinosin的線性范圍為0.39-196.00μg/mL。六種黃酮類化合物的日內(nèi)及日間精密度的RSD分別小于1.9％和4.0％；重復性的RSD小于4.1％；日內(nèi)及日間穩(wěn)定性的RSD分別小于4.7％和4.6％；回