雷公藤甲素對變應性鼻炎大鼠iNOS和Eotaxin及NF-κB影響的研究.pdf

1、背景和目的 變應性鼻炎(Allergic rhinitis，AR)是發(fā)生在鼻粘膜的變態(tài)反應性疾病，鼻粘膜的高反應性和高分泌性是其主要特點，以鼻癢、噴嚏、鼻漏、鼻塞為主要癥狀。廣泛的炎癥介質包括趨化因子(Chemokine)、酶等在鼻粘膜中的高表達是變應性鼻炎顯著的病理特征，更是其發(fā)病機制中的重要環(huán)節(jié)。但是，這些炎癥介質在變應性鼻炎鼻粘膜中高表達的分子機制并不十分清楚。近年來研究表明，這些炎癥介質的高表達是受某些轉錄因子調控的。其

2、中，核因子．-<,к>B(Nuclear factor-<,к>B,NF-<,к>B)在慢性炎癥性疾病中對許多炎癥介質具有直接調控作用。雷公藤甲素(Triptolide,TP)具有廣泛的免疫抑制作用，其突出特點是它有激素樣作用而無激素樣副作用，已成功應用于支氣管哮喘的臨床治療。本實驗擬通過AR大鼠模型觀察NF-<,к>B與Eotaxin及誘導型一氧化氮合酶(Inducible nitric oxide synthase,iNOS)之問的

3、關系以及TP對NF-<,к>3、Eotaxin和iNOS的作用，從而探討TP治療AR的可能機制；同時與激素類藥物作比較，為TP在AR臨床治療的應用前景提供實驗依據(jù)。 材料與方法 48只健康SD大鼠隨機分成四組：卵清蛋白(Ovalbumin,OVA)致敏組，雷公藤甲素(Triptolide,TP)處理組，地塞米松(Dexamethasone,DM)處理組和生理鹽水(Sodium chloride,SC)組，參照安云芳造模

4、方法并予改良，用卵清蛋白按照基礎致敏和激發(fā)兩個階段建立AR大鼠模型，TP處理組、DM處理組和SC組分別用TP、DM和SC在激發(fā)前30分鐘腹腔注射和鼻腔滴入。模型成功后，10﹪水合氯醛腹腔內注射麻醉，心臟放血法處死大鼠，取各組大鼠鼻粘膜組織，4﹪多聚甲醛固定，石蠟包埋，制成4-6μm切片，用多聚賴氨酸處理玻片，粘鋪切片。對各組鼻粘膜組織切片分別行HE染色和甲苯胺藍染色以進行病理觀察；用免疫組化技術觀察鼻粘膜組織iNOS、Eotaxin以及

5、NF-κB的表達情況，光鏡下任選5個視野，計算機圖象分析陽性區(qū)的灰度值，計算其平均值作為該片的代表值。實驗數(shù)據(jù)采用統(tǒng)計軟件包SPSS11.0，統(tǒng)計學分析采用單因素方差分析并繼以最小顯著差(LSD)t檢驗比較組間差異，相關分析采用直線相關分析法。 結果 (1)動物行為觀察：OVA致敏組大鼠煩躁不安、鼻癢、噴嚏、流涕癥狀明顯：TP處理組和DM處理組少量模型動物有輕微癥狀，神智安靜；SC組動物未見上述癥狀。 (2)鼻

6、粘膜HE染色鏡下觀察：OVA致敏組大鼠鼻粘膜腫脹增厚，腺腔及小血管管腔擴張，杯狀細胞增多。在粘膜及粘膜下層，小血管及腺體周圍，有大量炎性細胞浸潤；TP處理組和DM處理組炎癥表現(xiàn)較輕；SC組無明顯炎癥表現(xiàn)。EOS計數(shù)：OVA致敏組：9.104±0.76；TP處理組：3.934±0.51；DM處理組：4.014±0.59；SC組：0.524±0.43；OVA致敏組鼻粘膜嗜酸性粒細胞細胞數(shù)較SC組顯著升高(P<0.01)。TP和DM組可顯著降

7、低致敏大鼠鼻粘膜嗜酸性粒細胞的細胞數(shù)(P<0.01)。 (3)鼻粘膜甲苯胺藍染色鏡下觀察：OVA致敏組大鼠鼻粘膜腫脹增厚，腺腔及小血管擴張，在粘膜及粘膜下層可見肥大細胞沿血管壁廣泛浸潤。TP處理組和DM處理組病理改變較OVA組減輕；SC組僅見少量肥大細胞沿著小血管壁散在分布。肥大細胞計數(shù)：OVA致敏組：22.71±1.20；TP處理組：11.28±1.36；DM處理組：10.73±0.81；SC組：1.354±0.76；OVA致

8、敏組鼻粘膜肥大細胞細胞數(shù)較SC組顯著升高(P<0.01)。TP和DM組可顯著降低致敏大鼠鼻粘膜肥大細胞的細胞數(shù)(P<0.01)。 (4)免疫組化檢測結果：①鼻粘膜組織中iNOS的檢測結果：iNOS主要表達于上皮、腺體、血管內皮、平滑肌和炎性細胞中，胞漿著色，呈棕黃色。鼻粘膜組織中iNOS陽性區(qū)的灰度值為：OVA致敏組：92.41±12.23；TP處理組： 53.54±5.60；DM處理組：59.32±9.50；SC組：3

9、7.54±6.02。②鼻粘膜組織中Eotaxin的檢測結果：Eotaxin主要表達于上皮細胞、腺體細胞和一些炎性細胞中，胞漿著色，呈棕黃色。鼻粘膜組織中Eotaxin陽性區(qū)的灰度值為：OVA致敏組：98.23±11.23：TP處理組：55.21±8.26；DM處理組：58.73±10.65；SC組：38.36±5.89。③鼻粘膜組織中NF-кB的檢測結果：NF-кB主要表達于鼻粘膜組織上皮細胞、腺體細胞和血管周圍的炎性細胞，胞漿、胞核均

10、著色，呈棕黃色。鼻粘膜組織中NF-кB陽性區(qū)的灰度值為：OVA致敏組：97.10±11.16；TP處理組：60.08±6.47；DM處理組：64.48±10.13；SC組：38.75±7.47。iNOS、Eotaxin和NF-кB中，OVA致敏組或SC組與其它三組比較均有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；TP處理組和DM處理組比較無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。 (5)相關性分析：OVA致敏組大鼠鼻粘膜組織中iNOS的表達強度與Eot

11、axin的表達強度呈強烈正相關(r=0.886,P<0.01)；OVA致敏組大鼠鼻粘膜組織中NF-кB的表達強度與iNOS、Eotaxin的表達強度呈強烈正相關(r=0.818，r=0.908，P<0.01)。 結論 (1)TP對OVA致敏的變應性鼻炎大鼠模型癥狀有明顯的控制效果。 (2)TP可顯著降低變應性鼻炎大鼠模型鼻粘膜嗜酸性粒細胞和肥大細胞的浸潤。 (3)TP 可顯著抑制變應性鼻炎大鼠模型鼻粘膜