載STAT3 decoy ODN固體脂質納米粒對人卵巢癌靶向治療的實驗研究.pdf

1、本文主要從以下幾個方面進行論述：
　　第一部分 載STAT3誘騙寡核苷酸陽離子固體脂質納米粒的制備及表征
　　目的:
　　1.制備空白陽離子固體脂質納米粒(SLN)并檢測其粒徑、表面電位、穩(wěn)定性等特征。
　　2.探討SLN對卵巢癌細胞的細胞毒性。
　　3.制備載STAT3誘騙寡核苷酸陽離子固體脂體納米粒(SLN-STAT3 decoy ODN)。檢測其粒徑、表面電位等特征。
　　方法:
　　1.

2、采用單硬脂酸甘油酯和卵磷脂為脂質材料，以十六烷基三甲基溴化銨（CTAB）為表面活性劑，采用溶劑擴散法制備空白SLN。
　　2.將制備的SLN與適當比例的STAT3 decoy ODN復合，制備SLN-STAT3 decoyODN，采用瓊脂糖凝膠阻滯分析法驗證SLN-STAT3 decoy ODN的形成。
　　3.采用透射電鏡觀察SLN和SLN-STAT3 decoy ODN的形態(tài)特征，采用DelsaTMNano粒度測定儀測定

3、其粒徑和表面電位。
　　4.采用MTT法檢測SLN對卵巢癌細胞系SKOV3和A2780的細胞毒性。
　　結論:
　　1.成功制備了SLN載體體系和SLN-STAT3 decoy ODN復合物。
　　2.SLN生物安全性好，對卵巢癌細胞SKOV3和A2780無明顯的細胞毒性。
　　第二部分 SLN-STAT3 decoy ODN復合物靶向阻斷STAT3對人卵巢癌細胞體外抑制作用及機制研究
　　目的:

4、r>　　1.檢測卵巢癌細胞對SLN-STAT3 decoy ODN的攝取能力。
　　2.檢測SLN-STAT3 decoy ODN在體外對卵巢癌細胞的生長抑制作用。
　　3.探討SLN-STAT3 decoy ODN在體外對卵巢癌細胞凋亡、自噬和侵襲遷移能力的影響。
　　方法:
　　1.應用SLN-STAT3 decoy ODN轉染卵巢癌細胞SKOV3和A2780，采用熒光顯微鏡及流式細胞術檢測FITC標記的SL

5、N-STAT3 decoy ODN在卵巢癌細胞中的細胞攝取情況，Western blot法檢測STAT3，p-STAT3蛋白的表達情況。采用商品化的LipofectamineTM2000(Lipo)介導STAT3 decoy ODN的轉染作為陽性對照。
　　2.MTT法檢測SLN-STAT3 decoy ODN(0，12.5，25，50nmol/L)轉染卵巢癌細胞SKOV3和A2780后不同時間(24h，48h，72h)的細胞存活

6、率。檢測轉染48h后，不同處理組(NC，SLN，SLN-STAT3 decoy ODN，Lipo-STAT3 decoy ODN，naked STAT3 decoy ODN，SLN-STAT3 scrambled ODN，Lipo)的細胞存活率。
　　3.AnnexinⅤ-FITC/PI雙染色法檢測SLN-STAT3 decoy ODN對卵巢癌細胞凋亡的影響;Western blot法檢測SLN-STAT3 decoy ODN對卵

7、巢癌細胞凋亡相關蛋白表達的影響。
　　4.透射電鏡下觀察SLN-STAT3 decoy ODN轉染卵巢癌細胞后細胞內自噬體及自噬溶酶體的形態(tài)。吖啶橙染色檢測SLN-STAT3 decoy ODN對卵巢癌細胞自噬水平的影響。Western blot法檢測SLN-STAT3 decoy ODN對卵巢癌細胞自噬相關蛋白表達的影響。
　　5.采用細胞劃痕實驗檢測SLN-STAT3 decoy ODN對卵巢癌細胞遷移能力的影響。采用T

8、ranswell侵襲小室實驗檢測SLN-STAT3 decoy ODN對卵巢癌細胞侵襲能力的影響。Western blot法檢測SLN-STAT3 decoy ODN對卵巢癌細胞侵襲遷移相關蛋白表達的影響。
　　結論:
　　1.SLN-STAT3 decoy ODN能夠被卵巢癌細胞SKOV3和A2780高效攝取。
　　2.SLN-STAT3 decoy ODN能夠抑制卵巢癌細胞的生長，誘導卵巢癌細胞發(fā)生凋亡和自噬性細胞

9、死亡，抑制卵巢癌細胞的侵襲和遷移能力。
　　3.SLN-STAT3 decoy ODN有望成為卵巢癌基因治療的新策略。
　　第三部分 SLN-STAT3 decoy ODN復合物靶向阻斷STAT3對人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的治療作用及機制研究
　　目的:
　　1.建立人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型，探討SLN-STAT3 decoy ODN對荷瘤裸鼠的體內抗瘤效應。
　　2.探討SLN-STAT3 decoy O

10、DN體內抗瘤效應的機制。
　　3.探討SLN-STAT3 decoy ODN在裸鼠體內應用的安全性。
　　方法:
　　1.采用皮下注射法將人卵巢癌細胞SKOV3接種到裸鼠右側肩部皮下，建立裸鼠卵巢癌移植瘤模型。
　　2.接種后第14天，可觸及裸鼠皮下腫瘤結節(jié)時，將裸鼠隨機分為四組，每組5只，分別給予PBS，SLN-STAT3 scrambled ODN，naked STAT3 decoy ODN和 SLN-STA

11、T3 decoy ODN隔日進行瘤內多點注射，連續(xù)處理30天。每4日測量腫瘤體積。
　　3.治療結束后，取裸鼠腫瘤組織、心臟、肝臟及腎臟，制作石蠟切片，行HE染色，顯微鏡下觀察。取裸鼠血液，檢測SLN-STAT3 decoy ODN對血常規(guī)，肝腎功能的影響。
　　4.TUNEL法檢測SLN-STAT3 decoy ODN在裸鼠體內對卵巢癌細胞凋亡的影響。
　　5.透射電鏡下觀察裸鼠腫瘤組織的超微結構。
　　6.W

12、estern blot法檢測SLN-STAT3 decoy ODN對裸鼠腫瘤組織中凋亡、自噬和侵襲相關蛋白表達的影響。
　　結論:
　　1.SLN-STAT3 decoy ODN對人卵巢癌裸鼠移植瘤的生長有抑制作用。
　　2.SLN-STAT3 decoy ODN可以在裸鼠體內誘導卵巢癌細胞的凋亡和自噬性細胞死亡，抑制腫瘤組織的侵襲轉移。
　　3.SLN-STAT3 decoy ODN在裸鼠體內無明顯的骨髓抑制作