腺病毒介導的反義CⅡTA基因轉移對實驗性自身免疫性心肌炎的防治.pdf

1、該研究設計以小鼠pⅣ型CⅡTA mRNA為模板的反義片段,片段全長為431bp,覆蓋了起始密碼子上游22個堿基及閱讀框5'端409個堿基,也包含了第一外顯子和第二外顯子間的剪接位點;用常規(guī)分子生物學方法構建了反義片段的腺病毒表達載體(pAdEasy-1系統(tǒng));腺病毒載體經(jīng)HEK293細胞包裝產(chǎn)生含反義片段的重組腺病毒Ad-CⅡTA,用氯化銫密度梯度離心法獲得純化的高滴度腺病毒;采用多種方法對重組腺病毒進行了定量檢測與活性評價;并將Ad-

2、CⅡTA分別感染Hela細胞與P388D1細胞,觀察其對誘導型與組成型MHC-Ⅱ類分子表達的抑制;用純化的豬心肌肌凝蛋白免疫Balb/c小鼠,誘導實驗性自身免疫性心肌炎動物模型的產(chǎn)生,并分別于免疫后0~2天與14~16天經(jīng)尾靜脈注射重組腺病毒,觀察Ad-CⅡTA對實驗性自身免疫性心肌炎的預防與治療效果.第一部分,攜帶小鼠MHC-Ⅱ類分子反式作用因子基因反義片段的重組腺病毒載體的構建;第二部分,重組腺病毒的純化與定量檢測;第三部分,腺病毒

3、介導反義CⅡTA基因轉移抑制MHC-Ⅱ類分子表達的體外研究;第四部分,重組腺病毒Ad-CⅡTA介導基因轉移對實驗性自身免疫性心肌炎的防治.在該研究中,我們使用的Ad-CⅡTA在不同病理時期對EAM進行治療均取得了較好的效果,這為臨床治療自身免疫性心肌炎提供了有意義的啟示,因為EAM與人類心肌炎的病理過程十分相似.但是我們也注意到,人類心肌炎大多由嗜心性病毒引起,目前認為病毒并非是造成心肌炎病理損傷的直接原因,一過性的病毒感染導致受染心肌