CTLA4-Ig和抗CD40L單抗對實驗性自身免疫性心肌炎的影響.pdf

1、目的：研究CTLA4-Ig和抗CD40L單抗早期干預對T細胞活化的作用，探討阻斷CD28-B7、CD40-CD40L共刺激信號通路對自身免疫性心肌炎發(fā)生發(fā)展的影響及其機制。
　　 方法：60只Balb/C雄性小鼠隨機分成兩組：
　　 （1）實驗組50只；于實驗第1、8天給予皮下注射豬心肌肌球蛋白和CFA混合乳化液誘導制備EAM動物模型，并進一步分5個亞組：EAM對照組、CTLA4-Ig組、抗CD40L單抗組、聯(lián)合干預組及

2、IgG對照組，每組10只。CTLA4-Ig組、抗CD40L單抗組分別于初次免疫的第1、2、3天按1mg/kg體重小鼠尾靜脈注射CTLA4-Ig、抗CD40L單抗，聯(lián)合干預組等量注射兩者混合液，IgG對照組注射等量的小鼠IgG。
　　 （2）正常對照組10只；用PBS代替豬心肌肌球蛋白皮下注射。實驗第21d眼球采血后留取心臟標本，HE染色觀察心肌組織病理變化，血清Tn-I、CK-MB檢測反映心肌損傷情況，免疫組化及RQ-PCR檢測

3、心肌CTLA4、CD40L及其mRNA的表達，RQ-PCR法檢測心肌細胞因子IFN-γ及IL-4 mRNA表達變化，ELISA方法檢測血清IFN-γ、IL-4水平。
　　 結果：
　　 1．動物生存情況 正常對照組皮下免疫過程中死亡1只，其余小鼠全部存活。EAM對照組與IgG對照組小鼠體重生長緩慢，2-3W時甚至出現(xiàn)下降，其他各亞組體重無明顯差異。
　　 2．心肌組織病理改變 正常小鼠心肌細胞排列整齊，未見炎癥細

4、胞浸潤。 EAM對照組與IgG對照組小鼠組呈急性心肌炎表現(xiàn)，心肌組織廣泛炎癥細胞浸潤，心肌細胞肥大變性，肌漿溶解斷裂，炎癥積分明顯高于正常對照組（P<0.01）。免疫干預后小鼠心肌炎癥浸潤明顯好轉(zhuǎn)，炎癥積分降低，CTLA4-Ig組、抗CD40L單抗組見灶性、局限性炎癥細胞浸潤，聯(lián)合干預組僅見散在單個核細胞浸潤，心肌炎癥積分低于單一干預組（P<0.05），兩單一干預組間無明顯差異（P>0.05）。
　　 3．血清心肌損傷標志物檢測

5、 EAM對照組與IgG對照組小鼠血清Tn-I、 CK-MB水平顯著高于正常對照組（P<0.01）。免疫干預后，血清Tn-I、CK-MB水平下降，聯(lián)合干預組較單一干預組下降更為顯著（P<0.05），兩單一干預組間無明顯差異（P>0.05）。
　　 4．心肌組織 CTLA4、CD40L及其mRNA表達 免疫組化顯示EAM對照組及IgG對照組心肌廣泛浸潤的單個核細胞胞膜高表達CTLA4、CD40L，RQ-PCR反映其mRNA也顯著升高

6、，與正常對照組相比，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。免疫干預后，CTLA4、CD40L蛋白及mRNA水平均下降，聯(lián)合干預組較單一干預組下降更為顯著（P<0.05），兩單一干預組間無明顯差異（P>0.05），CTLA4、CD40L在心肌中的表達強度與炎癥積分呈正相關。
　　 5．心肌細胞因子IFN-γ、IL-4 mRNA表達 EAM對照組及IgG對照組小鼠，心肌IFN-γmRNA、IL-4 mRNA表達較正常對照組均明顯升高(P

7、<0.01)，以Th1細胞因子IFN-γmRNA升高更為顯著。兩單一干預組Th1細胞因子IFN-γmRNA表達降低，Th2細胞因子IL-4 mRNA表達升高，而聯(lián)合干預組IFN-γmRNA、IL-4 mRNA均明顯受到抑制，二者的表達都降低。
　　 6.血清IFN-γ、IL-4水平 EAM對照組及IgG對照組小鼠血清IFN-γ水平較正常對照組明顯升高（P<0.01），IL-4水平無明顯差異。免疫干預后，各干預組血清IFN-γ水平