吸煙對高密度脂蛋白功能的影響.pdf

1、背景和目的：
　　 高密度脂蛋白(high density lipoprotein，HDL)具有促進脂質逆轉運、抗氧化及抗炎癥等功能，因而在抗動脈粥樣硬化中起著重要作用。在臨床上，人們通過檢測高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)，即HDL中的膽固醇成分，從一定程度上來反映人體內循環(huán)血液中HDL的水平。人們很早就發(fā)現(xiàn)，HDL-C的水平與冠心病風險呈負相關，因此將升高HDL-C水平作為抗動脈粥樣硬化治療的靶標之一。然而近年來，人們發(fā)現(xiàn)，

2、HDL的功能具有兩面性，在某些急性應激或慢性炎癥狀態(tài)下，HDL膽固醇逆轉運的能力減弱，抗炎和抗氧化活性降低，甚至可能會變成促炎癥的作用。因而人們認識到，HDL的功能比水平更重要。
　　 吸煙是動脈粥樣硬化的重要危險因素，其中，影響血脂代謝是其主要機制之一。大量橫斷面的研究表明，長期吸煙會導致總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)及低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)的水平升高，而HDL-C水平則會降低，然而，我們對吸煙過程中HDL的功能

3、學方面的變化卻幾乎一無所知，目前仍不清楚以下幾個問題:①長期吸煙者的HDL功能有何變化？機制是什么？②在單次吸煙后，HDL的功能是否會發(fā)生變化，機制是什么？③吸煙的急性期和慢性期，HDL的功能是否不同？本研究即旨在觀察不吸煙的健康人在吸煙前后，以及長期吸煙的健康人，其HDL的抗氧化及抗炎癥功能有何變化，并探尋其機制。
　　 方法：
　　 1.收集8名不吸煙的健康受試者吸煙前后以及12名長期吸煙的健康受試者的血漿及血清樣本

4、，并將血樣分成3組:不吸煙組、單次吸煙組以及長期吸煙組，保存于-80℃待用；
　　 2.通過密度梯度離心方法分離高密度脂蛋白，測定其濃度并鑒定；
　　 3.酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測HDL上淀粉樣蛋白A(SAA)的含量；
　　 4.將各受試者的LDL及HDL先通過檢測紫外吸收OD234nm測定脂質基礎氧化程度，后加入Cu2+氧化，記錄氧化曲線各部分參數(shù)，評估各組LDL及HDL的基礎氧化程度和氧化易感性；<

5、br>　　 5.將各組受試者HDL與健康受試者低密度脂蛋白(LDLpool)混合，通過檢測紫外吸收OD234nm測定脂質基礎氧化程度，后加入Cu2+氧化LDL，記錄氧化曲線各部分參數(shù)，評估HDL抗氧化能力，并分析其機制；
　　 6.熒光法測定血清對氧磷酶-1(PON-1)活性；
　　 7.通過Transwell小室法測定LDL對THP-1細胞化學趨化的促進作用；
　　 8.通過Transwell小室法測定HDL

6、對THP-1細胞化學趨化的抑制作用。
　　 結果：
　　 1.吸煙組與不吸煙組的年齡(37±7.6歲比36±7.1歲，p=0.87)、BMI(22.9±0.76比22.8±0.48，p＝0.67)相匹配。
　　 2.與吸煙前相比，單次吸煙后，受試者的收縮壓(SBP，120.6±10.5mmHg比106.9±12.5mmHg，p<0.01)、脈壓(42.5±6.0mmHg比31.9±4.6mmHg，p<0.01)、

7、心率(84±4bpm比68±6bpm，p<0.01)及丙氨酸轉氨酶(ALT，28.98±12.04U/L比26.49±12.61U/L，p<0.01)均明顯升高，而舒張壓(DBP，78.1±8.0mmHg比75.0±10.4mmHg，p-0.09)，天冬氨酸轉氨酶(AST，27.01±4.66U/L比24.30±6.32U/L，p=0.06)及血糖(5.57±0.98mmol/L比4.93±0.63mmol/L，p＝0.06)也均有上升

8、趨勢。
　　 3.長期吸煙組與不吸煙組相比，脈壓明顯增大(38.3±7.8mmHg比31.9±4.6mmHg，p=0.02)，總膽紅素(TBil，10.27±3.70umol/L比14.13±4.24umol/L，p=0.04)及直接膽紅素(DBil，3.39±1.06umol/L比4.70±1.51umol/L，p=0.03)均明顯降低。
　　 4.單次吸煙后，HDL中SAA含量明顯升高(15.66±7.8ng/μg比

9、10.10±4.8ng/μg，p<0.001)；而長期吸煙組與單次吸煙組相比，則含量明顯下降(7.75±2.1ng/μg比15.66±7.8ng/μg，p<0.001)。
　　 5.長期吸煙組的LDL基礎OD值明顯高于不吸煙組(0.28±0.06比0.21±0.03，p=0.01)，也明顯高于單次吸煙組(0.28±0.06比0.20±0，06，p=0.02)。
　　 6.長期吸煙組的LDL氧化速度達峰時間明顯短于不吸煙組

10、(40.5±9.3min比53.8±12.5min，p=0，016)，也明顯短于單次吸煙組(40.5±9.3min比57.50±14.9min，p=0.007)o7.單次吸煙后，HDL+LDLpool的氧化遲滯時間(Tlag)有下降的趨勢(87.3±5.8min比91.6±7.7min，p=0.093)；而長期吸煙組與不吸煙組相比，則顯著延長(98.3±5.3min比91.63±7.7min，p=0.032)，與單次吸煙組相比，也顯著延

11、長(98.3±5.3min比87.3±5.8min，p<0.01)。
　　 8.單次吸煙后，HDL+LDLpool的氧化速度達峰時間有下降的趨勢(131.3±7.4min比126.3±6.4min，p=0.10)；而長期吸煙組與不吸煙組相比，則顯著延長(139.2±7.9min比131.3±7.4min，p=0.038)，與單次吸煙組相比，也顯著延長(139.2±7.9min比126.3±6.4min，p<0.01)。
　

12、　 9.不吸煙組與單次吸煙組相比，血清PON-1活性沒有顯著差異(0.21±0.05U/μL比0.21±0.05U/μL，p=0.90)；而長期吸煙組分別與不吸煙組(0.21±0.05U/μL比0.24±0.05U/μL，p=0.23)和單次吸煙組(0.24±0.05U/μL比0.21±0.05U/μL，p=0.30)相比，其血清PON-1活性也均無明顯差異。
　　 10.單次吸煙后，經(jīng)LDL孵育的THP-1細胞遷移數(shù)沒有明顯

13、變化(58±13/視野比63±10/視野，p=0.21)；而長期吸煙組與不吸煙組相比，有升高的趨勢(69±11/視野比58+13/視野，p=0.07)。
　　 11.單次吸煙后，經(jīng)HDL+LDLpool孵育的THP-1細胞遷移數(shù)有升高的趨勢(21±6/視野比16±4/視野，p=0.09)；而長期吸煙組與不吸煙組相比，THP-1細胞遷移數(shù)無明顯差異(17±4/視野比16±4/視野，p=0.63)，而與單次吸煙組相比，則有下降的趨勢

14、(17±4/視野比21±6/視野，p=0.09)。
　　 結論：
　　 1.單次吸煙后，機體處于急性應激及炎癥狀態(tài)，表現(xiàn)為收縮壓、脈壓、心率、ALT及HDL上SAA的濃度明顯上升，舒張壓、AST、血糖有上升趨勢。
　　 2.單次吸煙后，HDL的抗氧化和抗炎癥功能均下降，可能與HDL中SAA含量明顯升高有關；
　　 3.長期吸煙者處于慢性氧化應激及炎癥狀態(tài)，表現(xiàn)為血液中TBil及DBil等抗氧化物質水平明顯