太白山藤梨根提取物體外對(duì)人胃癌細(xì)胞MKN-45抗增殖及誘導(dǎo)調(diào)亡的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：通過對(duì)太白山藤梨根提取物(Radix Actinidiae extractive.RAE)進(jìn)行體外抗腫瘤作用研究，觀察不同濃度的藥物對(duì)人胃癌細(xì)胞MKN-45生長(zhǎng)的影響及對(duì)凋亡生物學(xué)行為的影響，以明確其抗癌作用的環(huán)節(jié)和藥理機(jī)制，為臨床研究有效抗癌藥物提供理論及實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：1、應(yīng)用MTT法、生長(zhǎng)曲線的測(cè)定，檢測(cè)藤梨根提取物體外對(duì)人胃癌細(xì)胞MIKN-45的抗增殖作用及藥物敏感性，以(100μg/ml、10μg/ml、1μg

2、/ml、0.1μg/ml、0.01μg/ml)5個(gè)藥物濃度作用于胃癌細(xì)胞，同時(shí)設(shè)空白對(duì)照組，檢測(cè)24h、48h、72h、96h的細(xì)胞存活率，并繪制生長(zhǎng)曲線；2、通過倒置顯微鏡和HE染色普通光學(xué)顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)變化并攝影；3、以1μg/ml、10μg/ml、100μg/ml濃度藥物作用MKN-45細(xì)胞48h后，同時(shí)設(shè)空白對(duì)照組，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期；4、DNA瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)細(xì)胞凋亡，提取經(jīng)lμg/ml、10μg/ml、100μg/

3、ml濃度藥物處理的細(xì)胞DNA，同時(shí)設(shè)空白對(duì)照組，于1.8﹪瓊脂糖凝膠電泳并用FB染色。電泳(電壓4V/cm)，結(jié)束后于紫外光凝膠成像系統(tǒng)掃描記錄。 結(jié)果：1、用MTT法和生長(zhǎng)曲線的檢測(cè)結(jié)果表明，藤梨根提取物在體外對(duì)胃癌細(xì)胞有明顯抗增殖作用，且抑制作用呈現(xiàn)濃度和時(shí)間依賴性；2、倒置顯微鏡下，不同濃度的藤梨根提取物作用于胃癌細(xì)胞48小時(shí)后，細(xì)胞之間距離增大，變圓的細(xì)胞數(shù)量增多，可見到細(xì)胞凋亡特征性的形態(tài)學(xué)變化，細(xì)胞皺縮，染色質(zhì)凝集，

4、核固縮碎裂，并可見細(xì)胞脫落懸浮于培養(yǎng)基中。 HE染色觀察，加藥48h后，同倒置顯微鏡下所見，并且細(xì)胞脫水濃縮伊紅染色增強(qiáng)，胞體縮小，胞膜完整，內(nèi)含染色質(zhì)高度濃縮的胞核呈深藍(lán)色，其染色質(zhì)濃縮聚集在細(xì)胞膜下呈深染的新月形或環(huán)形等典型細(xì)胞凋亡形態(tài)；3、流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞DNA含量結(jié)果表明，藤梨根提取物對(duì)胃癌細(xì)胞的作用表現(xiàn)為周期特異性，使細(xì)胞周期的循環(huán)被阻滯于G<,0>G<,1>期，進(jìn)一步誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。對(duì)照組凋亡率為0.53﹪，1μg/ml、1

5、0μg/ml、100μg/ml濃度的藤梨根提取物干預(yù)胃癌細(xì)胞48小時(shí)后均出現(xiàn)凋亡峰，細(xì)胞凋亡率分別為3.27﹪、8.97﹪、12.6﹪；4、DNA瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)細(xì)胞凋亡，含有藤梨根提取物的樣品中均可看到梯形凋亡條帶，并且藥物濃度越高，這一凋亡現(xiàn)象越明顯，以100μg/ml的最明顯，而陰性對(duì)照中沒有條帶。 結(jié)論：藤梨根提取物在體外對(duì)人胃癌細(xì)胞MKN-45有顯著的抗增殖及誘導(dǎo)凋亡作用，其作用機(jī)制可能是使胃癌細(xì)胞周期阻滯于G<,0