蒼術(shù)素誘導(dǎo)人胃癌MKN-45細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:
　　探討蒼術(shù)素(Atractylodin)抑制人胃癌MKN-45細(xì)胞增殖的作用及其作用機(jī)制，為研發(fā)新型抗腫瘤藥物提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)和理論基礎(chǔ)。
　　方法:
　　1.倒置顯微鏡觀察蒼術(shù)素對(duì)MKN-45細(xì)胞形態(tài)的影響;MTT法測(cè)定蒼術(shù)素誘導(dǎo)MKN-45細(xì)胞半數(shù)致死的藥物濃度和時(shí)間。
　　2.熒光顯微鏡結(jié)合Hoechst33258/PI染色觀察蒼術(shù)素對(duì)MKN-45細(xì)胞凋亡形態(tài)的影響。
　　3.流式細(xì)胞儀結(jié)合PI

2、染色和Annexin V/PI染色檢測(cè)蒼術(shù)素對(duì)MKN-45細(xì)胞的細(xì)胞周期的影響及細(xì)胞凋亡率。
　　4.Western blot法檢測(cè)經(jīng)蒼術(shù)素處理后MKN-45細(xì)胞相關(guān)凋亡蛋白表達(dá)的變化。
　　5.液相芯片法檢測(cè)蒼術(shù)素對(duì)MKN-45細(xì)胞分泌相關(guān)細(xì)胞因子的影響。
　　結(jié)果:
　　1.不同濃度蒼術(shù)素作用于MKN-45細(xì)胞后，濃度在5mg/L和10mg/L時(shí)促進(jìn)細(xì)胞增殖;濃度大于20mg/L時(shí)，抑制細(xì)胞增殖，且抑制作用呈

3、時(shí)間和濃度依賴性。
　　2.光鏡和熒光顯微鏡下可見(jiàn)經(jīng)濃度大于20mg/L的蒼術(shù)素處理12h后的細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)特征。
　　3.流式細(xì)胞儀結(jié)果可見(jiàn)MKN-45細(xì)胞的細(xì)胞周期停滯在G1期，凋亡細(xì)胞數(shù)量隨時(shí)間和濃度的增加而增多。
　　4.Western blot結(jié)果顯示經(jīng)蒼術(shù)素處理后，MKN-45細(xì)胞的PARP-1的表達(dá)量明顯增高，AIF被激活;caspase3、caspase8和caspase9未被激活，caspa

4、se3和caspase9前體蛋白表達(dá)量不變。
　　5.液相芯片結(jié)果表明，蒼術(shù)素抑制MKN-45細(xì)胞分泌IL-6、TNF-α、IL-10和IL-12p70，誘導(dǎo)細(xì)胞分泌IL-7和IL-1β。
　　結(jié)論:
　　本研究結(jié)果顯示，蒼術(shù)素抑制MKN-45細(xì)胞增殖，且抑制作用呈時(shí)間和濃度依賴性。蒼術(shù)素通過(guò)阻斷細(xì)胞周期、使細(xì)胞周期停滯在G1期，經(jīng)由非依賴caspase的PARP-1/AIF信號(hào)通路誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和影響細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子的