母豬乳脂合成關鍵基因篩選及長鏈脂肪酸對乳脂合成的調(diào)控研究.pdf

1、為了研究母豬乳腺乳脂合成的分子機制以及外源長鏈脂肪酸（LCFA）對乳脂合成的調(diào)控作用，本論文篩選了母豬乳腺組織中參與乳脂合成的關鍵基因，并進一步以母豬乳腺上皮細胞（pMEC）為模型探討了外源添加不同類型LCFA（棕櫚酸、油酸、亞油酸和硬脂酸）對乳脂合成的影響及其機制。本論文共開展了兩部分研究。
　　1.為篩選出乳腺乳脂合成的關鍵基因，本試驗采集6頭4~6胎大白母豬妊娠后期（-17±2天）、泌乳初期（1天）及泌乳高峰期（17±2天）

2、乳腺組織樣品，測定了乳腺組織和乳中的甘油三酯（TAG）含量、初乳和常乳的脂肪酸組成，檢測了70個乳脂合成與分泌相關基因的mRNA表達和關鍵基因的蛋白表達。結(jié)果如下：
　　（1）相比妊娠后期，母豬泌乳初期和高峰期乳腺組織中TAG含量分別提高了2倍和2.5倍（P<0.05）。
　?。?）與初乳相比，常乳中TAG含量提高了67％（P<0.05），且從頭合成的脂肪酸、飽和脂肪酸和單不飽和脂肪酸含量均顯著升高（P<0.05）。

3、　?。?）SLC27A3，ACSS2，ACSL3，F(xiàn)ABP3，F(xiàn)ADS1，ELOVL1，DGAT1，AGPAT1，LPIN1，PLIN2，SREBP1，INSIG1，INSIG2和PPARγ基因分別是其各家族基因在泌乳期母豬乳腺中表達量最高的成員，且其 mRNA表達量均隨泌乳的進行顯著上調(diào)（除PPARγ外）（P<0.05）。
　　（4）相比妊娠后期，母豬泌乳期乳腺中脂肪酸攝取（VLDLR，LPL，CD36），脂肪酸活化（ACSS2

4、，ACSL3，ACSL6）和細胞內(nèi)轉(zhuǎn)運（FABP3），脂肪酸從頭合成（ACACA，F(xiàn)ASN），脂肪酸延長（ELOVL1），脂肪酸脫飽和（SCD，F(xiàn)ADS1），甘油三酯合成（GPAM，AGPAT1，LPIN1，DGAT1），脂滴形成（BTN2A1，XDH，PLIN2），轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子（SREBP1，SCAP，INSIG1/2，PPARα）等基因表達量較高且豐度變化較大。
　　（5）相比妊娠后期，母豬泌乳期乳腺中CD36，F(xiàn)ABP3，A

5、CACA，SCD，F(xiàn)ASN，GPAM，AGPAT1，LPIN1，DGAT1，PLIN2，PPARα和SREBP1蛋白表達量均顯著升高（P<0.05），而PPARγ蛋白表達量只在泌乳初期乳腺中顯著升高（P<0.05）。
　　2.為探討不同類型LCFA對pMEC內(nèi)TAG合成的影響及其分子機制，本試驗以pMEC為體外模型，分別添加不同濃度（0，25，50，100，200，400和600μM）的棕櫚酸、油酸、亞油酸和硬脂酸處理細胞24h后

6、，測定了pMEC中TAG含量及乳脂合成相關基因mRNA和蛋白表達水平。結(jié)果如下：
　　（1）不同類型LCFA對pMEC內(nèi)TAG含量的影響
　　棕櫚酸、亞油酸及硬脂酸濃度在25~600μM時，pMEC內(nèi)TAG含量隨脂肪酸濃度增加而升高（P<0.05）；油酸濃度在50~600μM時，pMEC內(nèi)TAG含量隨油酸濃度增加而升高（P<0.05）。
　　（2）不同類型LCFA對pMEC中乳脂合成相關基因mRNA表達的影響
　

7、　①脂肪酸攝?。↙PL，CD36），TAG合成（GPAM，AGPAT6，LPIN2，DGAT1），脂滴形成（PLIN2），轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子（PPARγ）基因的mRNA表達隨 LCFA（棕櫚酸、油酸、亞油酸、硬脂酸）濃度增加顯著上調(diào)（P<0.05）；
　?、趶念^合成（ACACA，F(xiàn)ASN），轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子（SREBP1，INSIG1）基因的mRNA表達隨LCFA（棕櫚酸、油酸、亞油酸、硬脂酸）濃度增加顯著下調(diào)（P<0.05）；
　　

8、③ACSL3（脂肪酸活化）和FABP3（細胞內(nèi)轉(zhuǎn)運）基因的mRNA表達隨飽和脂肪酸（棕櫚酸和硬脂酸）濃度增加顯著上調(diào)（P<0.05），但隨不飽和脂肪酸（油酸和亞油酸）濃度增加而顯著下調(diào)（P<0.05）。
　　（3）不同類型LCFA對pMEC中乳脂合成相關蛋白表達的影響
　?、賞MEC中CD36（脂肪酸攝取）和DGAT1（TAG合成）蛋白表達水平隨LCFA濃度增加而升高（P<0.05）；
　　②ACACA（脂肪酸從頭合成

9、）蛋白表達隨棕櫚酸濃度增加而下降（P<0.05）；但在不同濃度油酸（400~600μM）、硬脂酸（200~600μM）條件下發(fā)生上調(diào)，而其蛋白表達未受到亞油酸濃度的影響；
　　③PPARγ（轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子）蛋白表達水平隨油酸、亞油酸及硬脂酸濃度增加而升高（P<0.05）；但未受到棕櫚酸濃度的影響；
　　④SREBP1（轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子）蛋白表達水平隨不飽和脂肪酸（油酸、亞油酸）濃度增加而降低（P<0.05），但未受到飽和脂肪酸（棕