利用牛乳汁體細(xì)胞研究乳脂合成相關(guān)基因的表達(dá).pdf

1、乳脂雖然為新生動物提供大量的熱能和必需脂肪酸,但高濃度的C14:0(豆蔻酸)和C16:0(棕櫚酸)促進(jìn)血漿中低密度脂蛋白膽固醇濃度的提高,從而誘發(fā)心腦血管疾病,對健康產(chǎn)生潛在的危害。因此合理改善乳脂肪構(gòu)成、提高乳品質(zhì)一直是奶業(yè)生產(chǎn)中受到重點(diǎn)關(guān)注的問題。為此本試驗(yàn)旨在利用乳汁體細(xì)胞研究不同泌乳期乳腺脂肪合成相關(guān)基因的表達(dá),為闡明影響乳脂合成因素及其內(nèi)在分子機(jī)理提供理論依據(jù),為反芻動物原料乳的優(yōu)化,特別是乳脂肪的營養(yǎng)調(diào)控和遺傳改良提供理論依

2、據(jù)。主要結(jié)果如下:
　　 乳汁體細(xì)胞的制備:以奶牛初乳、常乳和末乳為研究對象,用直接鏡檢法和血球計(jì)數(shù)板法及臺盼藍(lán)拒染法對SCC進(jìn)行鑒定,參照Puissant法提取乳汁體細(xì)胞中的RNA,通過電泳和紫外分光光度計(jì)對RNA的純度、完整性和含量進(jìn)行檢測,RT-PCR法對看家基因GAPDH進(jìn)行檢測。結(jié)果表明:SCC約在10～18.3萬/ml之間,證明是從健康狀態(tài)下采取的乳汁體細(xì)胞?；盍s為60～67.5％之間,提取RNA的OD260/OD

3、280值在1.65～2.0之間,含量為0.6～1.0mg/ml之間,在452bp處有看家基因GAPDH的目的條帶。表明成功地制備了乳汁體細(xì)胞。
　　 乳腺脂肪合成相關(guān)基因的表達(dá):以奶牛初乳、常乳和末乳中的乳汁體細(xì)胞為研究對象,看家基因GAPDH為內(nèi)參,對乳汁中LPL、CD36、VLDLR、ACSS2、ACSL1、FABP3、SCD、ACC、FASN、ADFP、XDH和BTN1A1mRNA進(jìn)行半定量RT-PCR分析。結(jié)果表明,LP

4、L、CD36、VLDLR、ACSS2、ACSL1、FABP3、SCD、ADFP、XDH和BTN1A1mRNA在初乳、常乳和末乳中均有表達(dá),而ACC、FASN只在初乳中表達(dá),常乳和末乳均未檢測到。與初乳相比,常乳和末乳中LPL、CD36、VLDLR、ACSS2、ACSL1、FABP3、SCD、ADFP、XDH和BTN1A1mRNA的轉(zhuǎn)錄水平均顯著降低(P<0.05),且常乳與末乳間差異不顯著(P>0.05)。以上結(jié)果與奶牛泌乳曲線基本吻合