仔豬早期性腺StAR mRNA表達(dá)規(guī)律研究.pdf

1、提高動物繁殖力一直是生殖生物學(xué)研究的目標(biāo)，也是畜牧業(yè)中必須解決的關(guān)鍵性問題，類固醇激素合成能力的強(qiáng)弱是影響繁殖力的一個重要因素。近半個世紀(jì)以來，類固醇激素生物合成的調(diào)節(jié)機(jī)制一直是內(nèi)分泌研究的熱點(diǎn)。以往通過體內(nèi)或體外研究方法，比較詳細(xì)地研究了促性腺激素對類固醇合成的慢反應(yīng)調(diào)節(jié)，為深入理解類固醇合成的調(diào)節(jié)機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。近年來的研究表明，類固醇合成的快速調(diào)節(jié)機(jī)制對于調(diào)節(jié)動物的生殖活動有著十分重要的意義，目前這一領(lǐng)域的研究多集中在實(shí)驗(yàn)動物，對

2、于家畜則很少見報(bào)道。豬作為我國最有優(yōu)勢的畜群種類，在世界畜牧產(chǎn)業(yè)的發(fā)展中具有舉足輕重的作用。為了充分發(fā)揮我國豬種特有的繁殖優(yōu)勢，本研究以仔豬為實(shí)驗(yàn)材料，對與類固醇激素合成有關(guān)的StAR基因進(jìn)行了研究。 類固醇合成快速調(diào)節(jié)蛋白(steroidogenicacuteregulatoryprotein，StAR)是類固醇激素合成的關(guān)鍵性調(diào)節(jié)因子，主要調(diào)節(jié)膽固醇從線粒體外膜轉(zhuǎn)運(yùn)到線粒體內(nèi)膜。StAR蛋白主要在類固醇合成組織中表達(dá)，人St

3、AR基因發(fā)生突變可引起先天性脂樣腎功能增生綜合癥(CLAH)，人和動物StAR蛋白水平受殺蟲劑影響而降低，不僅可引起睪酮分泌量降低，還會造成陰莖勃起障礙，導(dǎo)致雄性不育。 以往對StAR蛋白和StARmRNA的研究主要集中在動物的胚胎期和成年階段，而對發(fā)育早期階段的研究很少，王鮮忠等用免疫組化法和放射免疫法研究了StAR蛋白在仔豬睪丸中的表達(dá)規(guī)律，但對于StARmRNA在仔豬性腺發(fā)育早期表達(dá)還未有人報(bào)道。 本研究以重慶本地

4、長白仔豬作實(shí)驗(yàn)動物，從仔豬睪丸組織中提取RNA，做反轉(zhuǎn)錄PCR，獲得目的cDNA后進(jìn)行測序和序列分析，再對StARcDNA進(jìn)行地高辛標(biāo)記，獲得所需探針；同時，無菌條件下采集7、14、23、28、37日齡的仔豬睪丸和卵巢，處理后放入RNALOCKER液中保存，用4﹪多聚甲醛進(jìn)行固定，做冰凍切片：最后進(jìn)行組織原位雜交，檢測仔豬睪丸和卵巢中StARmRNA的表達(dá)水平。結(jié)果表明：(1)在7日齡，14日齡，23日齡和37日齡的仔豬睪丸中，StAR

5、mRNA主要在睪丸的間質(zhì)細(xì)胞中表達(dá)，7日齡幾乎沒有表達(dá)，14日齡，23日齡和37日齡的表達(dá)水平較高；(2)在14日齡，23日齡，28日齡和37日齡的仔豬卵巢中，StARmRNA主要在卵巢的初級卵泡的顆粒細(xì)胞中表達(dá)，7日齡仔豬卵巢上只有原始卵泡，無初級卵泡，StARmRNA在其中無表達(dá)信號，14日齡仔豬卵巢與7日齡的仔豬卵巢形態(tài)上無明顯變化，仍存在較多的原始卵泡，有少數(shù)卵泡細(xì)胞中已有StARmRNA表達(dá)，但信號很弱，23日齡仔豬卵巢內(nèi)原始