Wnt10b在小鼠毛囊中的表達(dá)及其作用的初步研究.pdf

1、毛囊是皮膚重要而復(fù)雜的附屬器官，是一個(gè)由上皮細(xì)胞和間充質(zhì)細(xì)胞相互作用形成的單位，從內(nèi)向外依次由毛干、內(nèi)根鞘和外根鞘組成。除外根鞘外，毛干、內(nèi)根鞘都是由毛母質(zhì)(matrix)細(xì)胞分化而來的。毛母質(zhì)是位于毛囊底部的一個(gè)增殖區(qū)，包繞毛乳頭，毛母質(zhì)細(xì)胞由毛囊干細(xì)胞分化而來的，具有高度的增殖潛能和一定的自我更新能力。毛囊發(fā)育和生長受眾多信號通路共同調(diào)控，其中Wnt信號通路發(fā)揮關(guān)鍵作用。已有研究表明，Wnt信號通路在毛囊的發(fā)育，干細(xì)胞的維持和激活，

2、毛干的分化，以及在人和鼠毛母質(zhì)瘤的形成中都扮演重要角色。WntlOb是Wnt家族中重要成員之一，研究表明Wnt10b在多種生物學(xué)作用如脂肪生成、骨生成、腫瘤發(fā)生和體軸的決定等方面都發(fā)揮重要作用。近來研究發(fā)現(xiàn)Wnt10b在觸須和體毛的胚胎發(fā)育過程中表達(dá)于毛囊上皮細(xì)胞中，可啟動(dòng)并促進(jìn)毛囊的發(fā)育。然而至今為止關(guān)于Wnt10b在出生后毛囊的表達(dá)規(guī)律以及其相關(guān)作用的研究報(bào)道還比較缺乏，有待我們的探討。 本課題采用了逆轉(zhuǎn)錄.聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(

3、RT-PCR)和免疫組織化學(xué)(Immunohistochemistry,IHC)技術(shù)檢測了Wnt10b在小鼠毛囊周期中mRNA與蛋白質(zhì)的表達(dá)，擴(kuò)增并純化了Wnt10b重組腺病毒，應(yīng)用其表達(dá)的Wnt10b蛋白來干預(yù)體外培養(yǎng)的觸須毛囊，初步探索了Wnt10b與毛囊周期性生長的關(guān)系和可能的作用，主要結(jié)果如下： 1、首次發(fā)現(xiàn)Wnt10b在小鼠毛囊中的表達(dá)具有規(guī)律性和特異性，在第一周期特異性表達(dá)于生長期毛囊的毛母質(zhì)部位，生長中期表達(dá)最強(qiáng)，

4、生長早期和末期表達(dá)較弱，在毛囊的其他細(xì)胞中沒有表達(dá)；退化期和靜止期在整個(gè)毛囊都不表達(dá)；第二周期生長早期表達(dá)于次級毛芽。Ki67在毛母質(zhì)中的表達(dá)變化規(guī)律以及在毛母質(zhì)中的表達(dá)部位與Wnt10b具有一致性。 2、我們對Wnt10b重組腺病毒進(jìn)行了逐級擴(kuò)增并應(yīng)用氯化銫超高速密度梯度離心法純化，病毒最終滴度達(dá)到109 PFU/ml； 3、首次發(fā)現(xiàn)加入Wnt10b重組腺病毒可明顯促進(jìn)體外器官培養(yǎng)的觸須毛囊毛干和內(nèi)根鞘生長，這與本課題