大鼠尾核內(nèi)Apelin的痛覺調(diào)制作用及其機制的實驗研究.pdf

1、目的:本實驗以大鼠甩尾潛伏期(TFL)作為痛閾指標，采用放射免疫測定法(RIA)檢測cAMP和cGMP的含量，大鼠尾核內(nèi)微量注射Apelin觀察其在大鼠中樞痛覺調(diào)制中的作用及其可能的作用機制。 方法: 1.大鼠尾核內(nèi)埋管：根據(jù)L.J.Pellegrino鼠腦定向圖譜在相當于大鼠尾核的顱骨部位(A:1.0 mm；LR:2.8 mm；H:5.0 mm)鉆孔埋管，手術(shù)3天后用于實驗。 2.痛閾測定：以輻射熱作為傷害性刺

2、激，采用大鼠的甩尾潛伏期作為痛閾指標，各組大鼠分別在給藥前、后測定其TFL值并計算痛閾變化率。 3.cAMP和cGMP的放射免疫測定：大鼠尾核內(nèi)給藥40min后取血取腦，按照試劑盒說明書進行樣品處理，采用放射免疫測定法檢測動物尾核與血漿中cAMP、cGMP的含量。 4.實驗分組 (1)尾核內(nèi)微量注射Apelin對大鼠熱傷害性反應(yīng)的影響。雄性SD大鼠隨機分組如下：①生理鹽水對照組；②嗎啡對照組；③Apelin 10

3、-3 mol/L組；④Apelin 10-4 mol/L組；⑤Apelin 10-5 mol/L組；⑥Apelin 10-6 mol/L組。每組10只。按照分組分別向大鼠尾核內(nèi)微量注射0.5 μl不同藥物，觀察給藥后90 min內(nèi)大鼠的痛閾變化情況，分析Apelin對大鼠熱傷害性反應(yīng)的影響。 (2)大鼠尾核內(nèi)微量注射Apelin(10-4 mol/L)對嗎啡中樞鎮(zhèn)痛作用的影響。雄性SD大鼠隨機分組如下：①生理鹽水對照組；②嗎啡對

4、照組；③Apelin組；④嗎啡+Apelin組；⑤納絡(luò)酮+Apelin組。每組10只。尾核內(nèi)兩種藥物給藥時間間隔為5 min，每次注射藥物0.5μl，對照組給藥方式同實驗組。觀察給藥后90 min內(nèi)大鼠的痛閾變化情況，分析Apelin對嗎啡中樞鎮(zhèn)痛作用的影響。 (3)尾核內(nèi)微量注射Apelin對大鼠血漿與尾核中cAMP和cGMP含量的影響。雄性SD大鼠隨機分組如下：①生理鹽水對照組；②嗎啡對照組；③Apelin 10-3 mol

5、/L組；④Apelin 10-4 mol/L組：⑤Apelin 10-5 mol/L組；⑥Apelin 10-6 mol/L組。每組6只。按照分組分別向大鼠尾核內(nèi)注射0.5μl不同藥物，40 min后取材測定cAMP和cGMP含量。 (4)尾核內(nèi)微量注射嗎啡后再注射Apelin(10-4 mol/L)對大鼠尾核與血漿中cAMP和cGMP含量的影響。雄性SD大鼠隨機分組如下：①生理鹽水對照組；②嗎啡對照組；③Apelin組；④嗎啡

6、+Apelin組。每組6只。兩次給藥時間間隔5 min，每次給藥劑量0.5μl，給藥40 min后取材測定cAMP和cGMP含量。 結(jié)果: 1.尾核內(nèi)微量注射不同濃度的Apelin后，結(jié)果顯示大鼠痛閾表現(xiàn)不同程度的下降。在Apelin濃度為10-3 mol/L～10-6 mol/L的范圍內(nèi)，大鼠痛閾下降幅度呈近似倒置鐘形，其中Apelin 10-4 mol/L濃度組大鼠痛閾下降幅度最顯著。大鼠尾核內(nèi)微量注射0.5μl濃度

7、為10-4 mol/L的Apelin 10 min后，痛閾下降-9.22％±1.26％，40 min后痛閾下降至最低-16.95％±1.46％，分別與生理鹽水組(-0.32％±1.2％、0.17％±0.80％)比較有統(tǒng)計學(xué)意義。提示在中樞痛覺調(diào)制過程中，Apelin易化大鼠的熱傷害性反應(yīng)，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中(CNS)有痛敏作用。 2.大鼠尾核內(nèi)微量注射0.5μl嗎啡，5 min后再注射0.5μl Apelin(10-4 mol/L

8、)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在90 min的觀察期內(nèi)，Apelin能抑制嗎啡的中樞鎮(zhèn)痛作用。尾核內(nèi)給藥40 min后，嗎啡+Apelin組痛閾變化率為3.03％±0.69％，與嗎啡組18.35％±1.64％比較顯著降低，有統(tǒng)計學(xué)意義。尾核內(nèi)給藥后，在90 min的觀察期內(nèi)，納絡(luò)酮+Apelin組大鼠痛閾與生理鹽水組相比顯著降低，與Apelin組相比顯著升高。 3.大鼠尾核內(nèi)微量注射0.5μl不同濃度的Apelin 40min后發(fā)現(xiàn)，大鼠尾核與血

9、漿內(nèi)cAMP含量呈現(xiàn)不同程度的降低，其中Apelin濃度為10-4mol/L組大鼠尾核cAMP含量為14.08±2.25 nmol/g，血漿cAMP含量為19.94±4.43 nmol/L，分別與生理鹽水組(133.05±20.41 nmol/g、38.66±6.73 nmol/L)比較，有非常顯著的統(tǒng)計學(xué)意義。 大鼠尾核內(nèi)微量注射0.5μl不同濃度的Apelin 40min后，大鼠尾核與血漿內(nèi)cGMP含量與生理鹽水組比較，無統(tǒng)

10、計學(xué)意義。 4.大鼠尾核內(nèi)微量注射0.5μl嗎啡，5 min后再注射0.5μl Apelin(10-4 mol/L)，給藥40 min后發(fā)現(xiàn)，嗎啡+Apelin組大鼠尾核cAMP含量為56.49±10.53 nmol/g，血漿cAMP含量為13.36±2.95 nmol/L，分別與生理鹽水組(126.34±12.3 nmol/g、36.87±3.61 nmol/L)比較顯著降低，有統(tǒng)計學(xué)意義，與嗎啡組(73.19±11.23 n

11、mol/g、27.95±1.55nmol/L)比較顯著降低，有統(tǒng)計學(xué)意義，與Apelin組(51.90±11.72 nmol/g、15.29±5.58 nmol/L)比較無統(tǒng)計學(xué)意義。大鼠尾核內(nèi)微量注射0.5μl嗎啡5 min后再注射0.5μl Apelin(10-4 mol/L)，給藥40min后結(jié)果表明，嗎啡+Apelin組大鼠尾核與血漿內(nèi)cGMP含量分別與生理鹽水組、嗎啡組比較無統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)論: 1.尾核內(nèi)微量