金雀異黃素合成工藝優(yōu)化及抗腫瘤活性研究.pdf

1、金雀異黃素(5，7，4′-三羥基異黃酮，genistein，Gen)是大豆異黃酮的主要成分，關(guān)于它的活性研究正日益深入。據(jù)報(bào)道，它的生物活性高于大豆異黃酮，其化學(xué)結(jié)構(gòu)和相對(duì)分子量與雌二醇相似，能與其竟?fàn)幋萍に厥荏w，故有雌激素性質(zhì)，可降低女性雌激素相關(guān)腫瘤的發(fā)病率，預(yù)防絕經(jīng)后婦女因雌激素水平下降而導(dǎo)致的疾病，如心血管疾病和骨質(zhì)疏松癥等。 目前，金雀異黃素主要來自大豆提取物，但因大豆中的含量極低，故產(chǎn)品成本較高。而隨著金雀異黃素的多

2、方面及較高的生物活性的逐漸發(fā)現(xiàn)以及應(yīng)用研究的不斷擴(kuò)大和深入，加之全球?qū)鹑府慄S素的需求量迅速增長(zhǎng)。迫切地需要用人工合成的方法獲取它以滿足研究和應(yīng)用的需要。 本研究首先以間苯三酚，對(duì)羥基苯乙酸為原料，在催化劑三氟化硼乙醚作用下，經(jīng)過Friedel-Crafts?；磻?yīng)制得了中間體2，4，6，4′-四羥基脫氧安息香；中間體再與二甲基甲酰胺、五氯化磷作用，經(jīng)過亞甲基的甲醛化、脫水環(huán)合生成金雀異黃素。所得產(chǎn)物經(jīng)IR、1H-NMR檢測(cè)，

3、并與標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照，確定合成了目標(biāo)產(chǎn)物金雀異黃素。在此基礎(chǔ)上，采用均勻設(shè)計(jì)，對(duì)合成反應(yīng)中涉及的主要影響因素進(jìn)行了考察，所得試驗(yàn)結(jié)果經(jīng)過統(tǒng)計(jì)軟件分析，采用逐步回歸的方法建立模型。最終確定：(1)中間體2，4，6，4′-四羥基脫氧安息香合成工藝優(yōu)化條件為：反應(yīng)溫度-15℃，反應(yīng)時(shí)間8h，加入三氟化硼乙醚2.8mol，其理論收率67.2％，經(jīng)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，在此工藝優(yōu)化條件下平均收率為66.4％；(2)金雀異黃素合成工藝優(yōu)化條件為：反應(yīng)溫度20℃，反應(yīng)

4、時(shí)間46min，加入三氟化硼乙醚6.5mmol，DMF0.06mol，PCl52mmol，理論收率72.4％，經(jīng)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，平均收率為71.6％。 流行病學(xué)調(diào)查、實(shí)驗(yàn)研究表明金雀異黃素對(duì)多種性激素依賴性腫瘤，如乳腺癌、前列腺癌等是一種有潛力的腫瘤化學(xué)預(yù)防劑，而對(duì)非性激素依賴性腫瘤，如胃癌的研究很少。 本研究采用人胃腺癌SGC-7901細(xì)胞作為離體實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，觀察金雀異黃素合成品對(duì)SGC-7901細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用及其抗癌的可能

5、機(jī)制，并與標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行對(duì)照。首先，采用MTT法觀察金雀異黃素對(duì)其細(xì)胞生長(zhǎng)的影響；其次，利用倒置顯微鏡、光學(xué)顯微鏡(HE染色)、透射電鏡觀察細(xì)胞形態(tài)變化；繼之，利用流式細(xì)胞儀測(cè)定細(xì)胞凋亡率；最后，通過RT-PCR檢測(cè)了與細(xì)胞凋亡相關(guān)的基因Bcl-2和Fas的mRNA表達(dá)。研究結(jié)果表明：金雀異黃素合成品對(duì)SGC-7901細(xì)胞生長(zhǎng)有明顯的抑制作用，且與天然提取的金雀異黃素標(biāo)準(zhǔn)品作用一致，并可通過抑制Bcl-2、促進(jìn)Fas的mRNA表達(dá)誘導(dǎo)細(xì)胞調(diào)