金雀異黃素對(duì)雄性斑馬魚(yú)VTG的誘導(dǎo)及其機(jī)理研究.pdf

1、金雀異黃素(Genistein，4’，5，7-三羥基異黃酮)是一種廣泛存在于豆類(lèi)植物中的異黃酮類(lèi)植物雌激素，化學(xué)結(jié)構(gòu)類(lèi)似于17β-雌二醇(E2)，是一種潛在的環(huán)境雌激素。目前金雀異黃素以較高濃度廣泛地存在于魚(yú)類(lèi)餌料和環(huán)境水體中，使魚(yú)類(lèi)面臨著食物和水體雙重暴露的威脅。弄清金雀異黃素對(duì)魚(yú)類(lèi)的雌激素效應(yīng)及其作用機(jī)理，對(duì)于發(fā)展水產(chǎn)養(yǎng)殖、保護(hù)漁業(yè)資源有著重要的理論和實(shí)際意義。
　　 雄魚(yú)及幼魚(yú)的卵黃原蛋白(VTG)作為一種公認(rèn)的檢測(cè)環(huán)境雌

2、激素效應(yīng)的生物標(biāo)志物，曾被用于金雀異黃素對(duì)魚(yú)類(lèi)的雌激素效應(yīng)的檢測(cè)。目前，雖然有研究證實(shí)含金雀異黃素的餌料喂養(yǎng)能誘導(dǎo)雄魚(yú)及幼魚(yú)體內(nèi)VTG的產(chǎn)生，但對(duì)其誘導(dǎo)機(jī)理卻尚未進(jìn)行深入研究。因此，本文驗(yàn)證了金雀異黃素水體暴露對(duì)雄性斑馬魚(yú)VTG的誘導(dǎo)效應(yīng)，并從金雀異黃素影響雌激素受體表達(dá)及性激素水平變化的角度，初步研究了其對(duì)VTG的誘導(dǎo)機(jī)理。
　　 本實(shí)驗(yàn)采用1μg/L、10μg/L、100μg/L、1000μg/L濃度的金雀異黃素對(duì)成年雄性斑

3、馬魚(yú)進(jìn)行水體暴露28天，通過(guò)real-time PCR技術(shù)檢測(cè)雄魚(yú)肝臟內(nèi)Vtg1mRNA的表達(dá)水平，驗(yàn)證水體中的金雀異黃素對(duì)魚(yú)類(lèi)VTG誘導(dǎo)的雌激素效應(yīng)；在此基礎(chǔ)上，通過(guò)檢測(cè)雄性斑馬魚(yú)肝臟內(nèi)ERα mRNA、ERβ mRNA的表達(dá)水平，進(jìn)一步研究了金雀異黃素在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中對(duì)魚(yú)類(lèi)VTG誘導(dǎo)的選擇性雌激素受體介導(dǎo)機(jī)制；并利用放射性免疫法檢測(cè)了雄性斑馬魚(yú)性腺內(nèi)睪酮和雌二醇水平的變化，探討金雀異黃素是否通過(guò)影響性激素水平來(lái)實(shí)現(xiàn)對(duì)VTG的誘導(dǎo)。

4、>　　 本文的研究結(jié)果表明：
　　 (1)1μg/L、10μg/L、100μg/L、1000μg/L的金雀異黃素水體暴露成熟雄性斑馬魚(yú)28天后，各處理組Vtg1 mRNA的表達(dá)水平均上升，10μg/L和100μg/L濃度組出現(xiàn)了顯著上升，高濃度組(1000μg/L)和E2對(duì)照組出現(xiàn)了極顯著上升，并具有劑量效應(yīng)關(guān)系，證實(shí)了金雀異黃素能夠誘導(dǎo)魚(yú)類(lèi)VTG的產(chǎn)生。
　　 (2)與溶劑對(duì)照組相比，金雀異黃素處理組ERα mRNA

5、的表達(dá)水平極顯著降低，除低濃度組(1μg/L)外其他濃度組ERβ mRNA的表達(dá)水平均出現(xiàn)了極顯著上升；E2處理組兩種ER基因的表達(dá)水平均極顯著上升。證實(shí)了金雀異黃素對(duì)魚(yú)類(lèi)VTG基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)主要是通過(guò)ERβ來(lái)介導(dǎo)的，具有ERβ依賴(lài)性，推測(cè)這可能是金雀異黃素與ERβ的選擇性結(jié)合及其結(jié)合力的大小所決定的。
　　 (3)除1μg/L和100μg/L濃度組外其他金雀異黃素處理組魚(yú)體性腺內(nèi)睪酮含量極顯著下降，各處理組雌二醇含量均極顯著上